挥发性脂肪酸VFA测定步骤与方法.docx

挥发性脂肪酸的测定
一、 GC （ Gas chromatograph ）工作条件
仪器：GC-14B型气相色谱仪（日本岛津公司）
毛细柱：NUKOLTM Capillary Column （ Supelco ） ； Column
挥发性脂肪酸的测定
一、 GC （ Gas chromatograph ）工作条件
仪器：GC-14B型气相色谱仪（日本岛津公司）
毛细柱：NUKOLTM Capillary Column （ Supelco ） ； Column
-07B
30mX 阿 film thickness
气相色谱仪参数：色谱柱采用毛细吸管柱，柱温130 C,汽化温度
180 C,采用氢离子火焰检测器，检测温度180 C,载气为氮气，压力为60 KPa，氢 气压力为50 KPa，氧 气压力50 KPa，灵敏度（档）为101，
二、 样品制备
试剂制备
（1） 配制25%w/v的偏磷酸溶液，将25g偏磷酸溶在100mL双蒸 水中
（2） 巴豆酸的配制， 酸，定容到 100mL。（可先用80 ml双蒸水，加热溶解偏磷酸，然后定容至100 ml）
（3 ）标准样品， g、 g、 9、、，分别溶于双蒸水中，再各自 定容至100 mL。
样品制备
（1） 发酵液取（或过滤瘤胃液）VFA测定1ml样品到离心管中， ml的偏磷 酸巴豆酸混合溶液，-20 C冰箱保存过夜，解冻后12000rpm离心5min，取上清 液保存，测 定前再12000rpm离心5mi n（ Am针式滤器，滤液直 ， — AL。
（2） 食糜及粪样VFA测定 取1g置于离心管中，加入5 — 10倍的双 蒸水，混合均 匀。取1mL上清夜，。其 它步骤同上。
保留时间的确定
与样品处理相同，在1 豆酸的混合样， 上样测出乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸的保留时间。
有机酸浓度的计算
通过标准样品和内标巴豆酸各自的（或浓度）和峰面积可以计 算出乙酸、丙酸
及丁酸等有机酸的相对校正因子，然后根据乙酸、丙酸及丁酸的重量（或浓度）与其 峰面积成正比计算出各个样品中的乙酸、丙酸及丁酸浓度。
（样品某酸峰面积值X巴豆酸标样峰面积X某酸标样浓度）
某酸浓度（mM）=
（样品中巴豆酸面积值X标样某酸峰面积）
挥发酸标样的质量和换算的浓度
标样浓度
质量 /g/100mL
分子量
浓度/mM
n
Im 一 一而八



乙酸酸



丙酸



」酸



异」酸



戊酸



异