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流式细胞术的发展史
1934年细胞在显微镜载物台的毛细管中流过。
1949年流动的悬浮粒子计数方法—Coulter效应。
1967年发展了一种液流束、照明光轴、检测系统三者垂直的流失细胞仪。
80年代出现了完善的流失细胞仪。
概述
流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一种自动分析细胞的高技术,其原理是悬浮在液体中的分散细胞一个个地依次通过测量区,当每一个细胞通过测量区时产生电信号,这些信号可以代表荧光、光散射,光吸收或细胞的阻抗等。这些信号可以被测量、存贮、显示,于是细胞的一系列重要的物理特性和生化特性就被快速地、大量地测定。
上述特性可以是细胞的大小、活性,核酸的数量、酶、抗原等等。仪器还可以根据所规定的参量把指定的细胞亚群从整个细胞群体中分选出来。
流式细胞术在当前的细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、遗传学、病理学、临床检验学等各领域有着十分广泛的用途。
流式细胞术是对悬液中的细胞或细胞器进行快速可达每秒钟数千个乃至上万个细胞。这样,它就可与显微镜相互补充。显微镜术可以研究组织的结构、细胞定位和荧光在细胞中的分布;而多数流式细胞术是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的总核酸,总蛋白等而不能测量细胞中某一特定部位的核酸或蛋白,这是它的不足之处。
由于现代荧光技术和多参数相关测量技术的发展,流式细胞术在细胞群体或组成群体的亚群进行定量分析时,又具有其他手段无法比拟的优越性。
用飞点扫描技术或缝隙扫描技术得到了细胞形态学方面低分辨率的信息,从而改变了流式细胞仪零分辨率的传统观点。
流式细胞仪的结构
FCM是由细胞流动室、光源、聚光装置、信号检测器、电子计算机及高级别仪器具有的细胞分选装置构成。
细胞流动室
细胞流动室是FCM的心脏,它是根据流体力学中的层流鞘液原理设计而成,其结构包括石英小室形成的鞘液腔及插入其中的样品管。细胞呈单个排列通过流动室。
光源
常用激光器:
氢离子激光器 488nm兰色激光
氩离子激光器
氪离子激光器
聚光系统和检测系统
透镜、小孔、多种滤片
检测器、放大器将光信号变成电脉冲信号
计算机
信号变成数据文件存储、分析。