GM试验标准操作规程.doc

GM试验标准操作规程
1．目的
规范GM试验标准操作规程。

经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。
：
采用酶联免疫双抗体夹心一步法（ELISA）半定量检测人血清标本中半乳甘露聚糖抗原。
4．原理
GM试验标准操作规程
1．目的
规范GM试验标准操作规程。

经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。
：
采用酶联免疫双抗体夹心一步法（ELISA）半定量检测人血清标本中半乳甘露聚糖抗原。
4．原理
采用双抗体夹心ELISA方法检测血清样本中半乳甘露聚糖抗原。微板中包被半乳甘露聚糖抗体，可与样本中半乳甘露聚糖抗原和试剂中酶标抗体试剂结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度（OD值），经公式计算得到I值，根据I值与cut-off值（）的比较判断有无曲霉菌的感染或感染的程度。
5．样本要求
：血清
：见试剂说明书
: 标本编号后离心3000r/min，10min当日不做的标本离心后及时放入2-8℃冰箱冷藏，详见试剂说明书。
6．操作步骤：
，恢复至室温状态方可使用, 提前40分钟将水浴箱调成100℃。：将R2浓缩清洗液用蒸馏水以1：20稀释，备用。
：300ul质控血清/病人样本+100ul样本处理液R7（专用无热源离心管和枪头）混合振荡后进行水浴100℃ 3min，然后10000g离心10min,取上清液待用。
,将不准备使用的反应条返回袋中，连同干燥剂一起，封入袋中。每孔加50ul酶结合物R6,再依次每孔加入50ul已处理质控血清/病人标本的上清液。密封膜封好，在37℃±1℃温度下孵育90±5min。
：5次，每孔加满但不可溢出，间隔2-3S倒掉，最后一次拍干。
。
（18-25℃）避光孵育30±5min。
：加入100ul终止液R10，并小心擦干微板底部。
：加入终止液30min之内，在450/620nm处读取OD值。并计算I值

结果解释：阳性结果 I值≥ 阴性结果 I值<
在受检标本中是否存在或缺失半乳甘露聚糖抗原,可通过每个病人样本的指数计算来断定。指数（I）是样本的光密度值除以含Cut-off对照血清的小孔光密度值均值得到的。
Cut-off对照光密度均值的计算
Cut-off对照血清R4两个小孔的光密度总和除以2。
每个受检血清指数I的计算
为每个受检血清计算下面的比率：
I=[样本光密度/Cut-off对照光密度均值]
指数<：
指数<
注释：阴性结果表示病人的结果低于实验的可检测水平。
阴性结果不排除侵袭性曲霉菌感染的诊断。如果结果是阴性的，而怀疑感染了疾病，建议重新检测。
指数≥:
指数≥