真菌 染色.docx

、概
述
真菌是指具有真正细胞核、产生孢子、不含叶绿素,以寄生或腐生方式吸取养料,能进行有性和(或)无性繁殖,具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。真菌侵犯人体常继发于其他疾患,如恶性肿瘤、TB、糖尿病等、概
述
真菌是指具有真正细胞核、产生孢子、不含叶绿素,以寄生或腐生方式吸取养料,能进行有性和(或)无性繁殖,具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。真菌侵犯人体常继发于其他疾患,如恶性肿瘤、TB、糖尿病等慢性消耗性疾病;大剤量X线照射;免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下;大量应用肾上腺皮质激素的病人,其炎症反应多受抑制,也容易感染真菌;另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤,,使原来不致病的真菌转为致病真菌。因此,真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。
真菌分为浅部真菌和深部真菌。浅部真菌:主要侵犯机体皮肤,寄生和腐生于表皮,毛发和甲板的角质组织中,引起浅部真菌病,简称癣病。临床最多见的浅部真菌病有:体癣、股癣、手癣和足癣。深部真菌:指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.;按生物学性状的不同又分为:酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。深部真菌常见的有:念珠菌,隐球菌,组织胞浆菌,马尔尼菲青霉菌,曲霉,毛霉菌,孢子菌丝等。
二、常见真菌的形态特征
真菌的大小差异悬殊,大者如碗口,不属微生物范畴,例如灵芝;小者肉眼看不到,只能用显微镜观察。真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型,单细胞真菌呈圆形或卵圆性,常见于酵母菌和酵母样菌;多细胞真菌多呈丝状,
分枝交织成团,也称为丝状菌,即一般通称为霉菌。
三、真菌的基本结构
真菌由菌丝和孢子构成。孢子是真菌的生殖结构,分为有性孢子和无性孢子。在适宜条件下,菌丝是由孢子生出芽管,逐渐延长呈丝状,生物学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。
真菌的染色方法
真菌用H-E染色一般着色不良,因此需用特殊的染色方法来显色,六胺银法(GMS)用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基,醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。PAS法用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基,后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。这两种方法可显示大多数真菌,是最广泛最常用的染色方法。
近年来,有报道用网状纤维的染色方法(G-S)来显示真菌,特别是曲球
菌的染色显示效果较佳。现对常见的几种真菌作以下三种染色方法进行探讨。
(一)六胺银染色方法(GMS)
操作方法:
⑴切片脱蜡至水。
⑵8%铬酸水溶液氧化20分钟,自来水稍洗。
⑶%偏重亚硫酸钠液处理1分钟,流水冲洗5分钟,再用蒸馏水洗2次。
⑷浸入已预热(约15-30分钟)的六胺银工作液中分三种方式处理:
水浴锅内恒温处理(50-52°C):先将已盛有六胺银工作液的5片装高
身染色缸置入水浴锅内预热15-30分钟,再将处理好的玻片置入六胺银
工作液中反应30-60分钟,中途显微镜观察,至见到菌丝呈黑褐色为止。
电热恒温箱内处理(58C-60C):方法同上,在六胺银工作液中反应
的时间较长需60-90分钟,蒸馏水稍洗.
微波炉滴染:取微波炉专用蒸盒,底放50ml水,用于吸热保湿;玻片
放置隔层,滴加六胺