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真菌染色
最近在看关于真菌的染色方面的资料,现在总结一下发出来,大家共同学习一下。
一、背景介绍
真菌属于真核生物,没有质体,营养方式为吸收,无吞噬作用。细胞壁含有甲壳质和β-葡聚糖。可引起人类,动物的疾病,称为真菌病,还可引起植物的疾病、人类过敏性疾病和真菌毒素中毒症。真菌侵犯人体常继发于其他疾患,如恶性肿瘤、糖尿病等慢性消耗性疾病;大剤量X线照射;免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下;大量应用肾上腺皮质激素的病人,其炎症反应多受抑制,也容易感染真菌;另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤,,使原来不致病的真菌转为致病真菌。因此,真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。
真菌分为浅部真菌和深部真菌。浅部真菌:主要侵犯机体皮肤,寄生和腐生于表皮,毛发和甲板的角质组织中,引起浅部真菌病,简称癣病。临床最多见的浅部真菌病有:体癣、股癣、手癣和足癣。
深部真菌:指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.;按生物学性状的不同又分为:酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。深部真菌常见的有:念珠菌,隐球菌,组织胞浆菌,马尔尼菲青霉菌,曲霉,毛霉菌,孢子菌丝等。
真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型,单细胞真菌呈圆形或卵圆性,
常见于酵母菌和酵母样菌;多细胞真菌多呈丝状,分枝交织成团,也称为丝状菌,即一般通称为霉菌。由菌丝和孢子构成。孢子是真菌的生殖结构,分为有性孢子和无性孢子。在适宜条件下,菌丝是由孢子生出芽管,逐渐延长呈丝状,生物学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。
二、常用检查方法
1、直接镜检:直接镜检的方法方便经济,可采用不染色的湿片如KOH涂片或乳酸酚棉蓝涂片。对浅表和皮下真菌感染最有帮助,一般在有菌部位发现大量真菌菌丝即可作出诊断,可在几分钟内完成,并且观察到的真菌形态可以提供有价值的临床信息。但是缺点在于阳性率较低,隐形结果也不能排除诊断。
2、真菌的染色方法:
①革兰染色:所有真菌真菌、放线菌均为革兰染色阳性,被染成蓝黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌及诺卡菌放线菌的感染。
②吉姆萨染色可用于骨髓涂片和其他标本中荚膜组织胞浆菌和马内菲青霉的检测。用吉姆萨染色必须要有指控涂片。
③PAS法:用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基,后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。
操作方法:
(1) 切片脱蜡至水。
(2) %高碘酸氧化5-8分钟。
(3) 流水冲洗2分钟,再用蒸馏水洗。
(4) 入无色品红液于暗处并加盖作用10-20分钟。
(5) %偏重亚硫酸钠液滴洗2次,每次约1分钟。
(6) 流水冲洗5分钟。
(7) %亮绿水溶液复染。
(8) 稍水洗。
(9) 常规脱水透明封片.
染色结果:
真菌菌丝和孢子呈品红色,其他组织绿色
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无色品红液(Schiff氏试剂)的试剂配制主要是试剂的纯度要高,才能配制出理想的无色品红液,染色才能成功。
④六胺银法(GMS):用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基,醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。
操作方法:
⑴切片脱蜡至水。
⑵ 8%铬酸水溶液氧化20分钟,自来水稍洗。
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