强心苷的提取与分离.docx

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提取
分离
色谱鉴定
纸色谱
薄层色谱
强心苷的分离提纯通常比较复杂与困难,因为它在植物中的含量一般都比较低(1%以下),而且同一中药中所含的强心苷类成分不仅种类多、结构性质相近,还易受植物体内酶、酸的影响生成相应的次生苷,从而增加了成分的复杂性,同时共存的糖类、鞣质、皂苷、色素等,往往能影响或改变强心苷的溶解性,这些都增加了提取分离工作的难度。
提取时还需考虑强心苷在植物体中的存在形式。如需提取原生苷,要注意抑制酶的活性,防止酶水解的发生。措施诸如原料采收后要低温50°C〜60°C)通风快速干燥、保存期间注意防潮、用乙醇提取以破坏酶的活性。同时还要注意在提取过程中避免酸或碱的影响。如需提取次生苷,则要利用酶的活性,如采用发酵法进行酶解等。
(一)提取
提取强心苷通常用70%〜80%的乙醇为溶剂,若原料为种子类药材或含脂类杂质较多时,需先用石油醚或汽油脱脂处理后再提取;若原料为叶或全草,含叶绿素较多时,可用析胶法,将醇提液浓缩后静置,使叶绿素等脂溶性杂质成胶状沉淀析出,滤过除去,也可用活性炭吸附法除去稀醇提取液中的叶绿素。提取液中共存的糖、水溶性色素、鞣质、皂苷、酸性及酚性等物质可用氧化铝、聚酰胺吸附法或铅盐沉淀法除去,但需注意强心苷也有可能被吸附而损失。
提取液经上述初步除杂后,可用氯仿和不同比例的氯仿-甲醇(乙醇)溶液依次萃取,将强心苷按极性大小不同分为若干部分,但每一部分仍为极性相似强心苷的混合物,需做进一步分离
二)分离
混合强心苷的分离可用萃取法、逆流分溶法和色谱法,并对其中含量较高的组分选用适当溶剂反复结晶以获得单体。多数情况下,由于混合强心苷的组成复杂,往往需要几种方法配合使用,尤其结合各种色谱法进一步分离。
常用的色谱法有吸附色谱和分配色谱。分离亲脂性强心苷(如单糖苷、次生苷)和苷元时,一般选用吸附色谱,吸附剂用硅胶或中性氧化铝,洗脱剂可用氯仿-甲醇、酯酸乙酯-甲醇、苯、丙酮等。分离弱亲脂性强心苷时,宜用分配色谱,常用支持剂为硅胶、硅藻土纤维素,洗脱剂为不同比例的醋酸乙酯-甲醇-水或氯仿-甲醇-水。
(三)色谱鉴定
纸色谱
强心苷的纸色谱常用的溶剂系统多由氯仿、醋酸乙酯、苯、甲苯等有机溶剂与水混合而成,但因水在这些溶剂中的溶解度较小,可通过加入适量乙醇的方法来增加溶剂系统的含水量,以利于弱亲脂性强心苷的分离。
通常强心苷的亲脂性较强时,多将滤纸预先用甲酰胺或丙二醇浸渍数分钟作为固定相,以苯或甲苯(用甲酰胺饱和)为移动相。当强心苷的亲脂性较弱时,仍可以前者为固定相,只是将移动相改为极性较大的溶剂,如用二甲苯和丁酮的混合液,或氯仿、苯和乙醇的混合液,或用氯仿-四氢咲喃-甲酰胺(50:50:)、丁酮-二甲苯-甲酰胺(50:50:4)等溶剂系统作移动相。亲水性较强的强心苷,宜用水浸透滤纸作固定相,用水饱和的丁酮或乙醇-甲苯-水(4:6:1)、氯仿-甲醇-水(10:4:5或10:8:5)作移动相。
薄层色谱
在强心苷的薄层色谱中,以分配色谱的分离效果较好。不但所得色斑颜色清晰、色泽集中,而且薄层上能承载的样品量也较大,因此样品量稍大时也不会出现拖尾现象。分配色谱主要用于分离极性较强的强心苷类化合物,常用硅藻土、纤维素粉作支持剂,固定相可用甲酰胺、二甲基甲酰胺、乙二醇等,移动相用氯仿-丙酮(4:1)、氯仿-正丁醇(19:1)等溶剂系统。
强心苷的薄层色谱鉴定也可用吸附色谱,但因强心苷分子中常含有较多的极性基团(如多糖苷或苷元上的极性基团多),因而不宜用吸附性能强的吸附剂如氧化铝,而多用硅胶,
展开剂系统有二氯甲烷-甲醇-甲酰胺(80:19:1)、醋酸乙酯-甲醇-水(80:5:5)等含有少量水或甲酰胺的混合溶剂,可有效减轻拖尾现象。
强心苷的纸色谱和薄层色谱中常用的显色剂有:①2%3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾水溶液等体积混合,喷后强心苷显红色,几分钟后褪色。②1%苦味酸水溶液与10%氢氧化钠水溶液(95:5)混合,喷后于95°C左右烘约5分钟,强心苷显橙红色。
③2%三氯化锑的氯仿溶液,喷后于100C烘5分钟即显色,颜色随强心苷及苷元结构的不同而不同。
氧化铝是一种极性吸附剂,对极性大的成分吸附力强,故成分的极性越大,由于被吸附力越强,在色谱中的移动速度越慢,在柱内保留时间越长,就越后被洗脱。因此混合物中的各成分将按极性由小至大的顺序依次被洗脱下来。
黄花夹竹桃中强心苷类化学成分的提取分离技术
黄花夹竹桃(ThevetiaPeruviana)为夹竹桃科植物。性寒味苦,有毒,具有强心利尿、祛痰定喘、祛瘀镇痛功效。临床用于治疗心力衰竭、喘息咳嗽、跌打损伤、肿痛等。
从黄花夹竹桃果仁中可提制强心灵,方法是以脱脂后的果仁粉末为原料,先进行发酵酶解处理,再以乙醇为溶剂从中渗漉提取总次生苷,提取液于60C以下减压浓缩,放冷,即得强心灵粗品,继而用乙醇溶解粗品,活性炭脱色,重结晶,即得强心灵纯品,黄花夹竹桃中强心苷的提取工艺流程:
若要继续分离强心灵中的5种单体成分,可用柱色谱,以中性氧化铝为吸附剂,用苯-氯仿
(1:1、1:3、1:4)、氯仿、氯仿-甲醇(:、99:1、98:2)、甲醇依次洗脱,可先后得
到极性由小到大的各个成分,即:单乙酰黄夹次苷乙、黄夹次苷乙、黄夹次苷甲、黄夹次苷丙、黄夹次苷丁。
黄花夹竹桃果仁粉
I苯或石油醸连集回流脱脂脱爲末
加入5倍量的水及Z5貓的甲苯「加噩于v35〜40t恒温箱以堀解24小吋
醯解后的粉末
加入15倍量EtOH搅样飞〜20分钟,浸泡12小时后渗再加入W倍量ELOH继续渗漉
药瀆 BOH渗滾液
甸T下减压回收EtOH至1:25(生药;渗漉液),
然后加水使成1:,放辻析晶,过滤
滤液
加入40倍畐95號ElOHtl热洛解,再加入粗品量巧%的活性炭冈说半小时找色「过滤
活性炭(弃去)
EtOH液
减E浓缩至1:瓦加入3倍量水,放置加滤
结晶
了0<?干燥
滤液
毛地黄中强心苷化合物的提取分离技术
毛花洋地黄(Digitalislanata)是玄参科植物,应用于临床已有百年历史,至今仍是治疗心力衰竭的有效药物。
毛花洋地黄是制备强心药西地兰(cedilanid,又称去乙酰毛花洋地黄苷丙)和地高辛(digoxin,又称异羟基洋地黄毒苷)的主要原料。
西地兰的提制:西地兰是毛花洋地黄苷丙的去乙酰化物。其提制工艺分为提取总苷、分离苷丙、苷丙去乙酰基三步。

根据溶解性用乙醇提取原料药,浓缩后经析胶、氯仿洗涤除去脂杂,最后用含醇氯仿
萃取出总苷。
由于要提取的总苷均为原生苷,可溶于乙醇,且乙醇还可抑制酶的活性,防止酶水解的发
生,故选用乙醇为提取溶剂。又因强心苷对酸碱不稳定,故醇提液需调至中性再减压回收。
继而用氯仿洗除去脂杂(苷丙因在苷甲、乙、丙三者中极性最大,最难溶于氯仿而留在水
层),最后利用苷甲、乙、丙均可溶于氯仿-乙醇(3:1或2:1)用含醇氯仿萃取出总苷同
时与停留在水层中的水杂分离。
毛花洋地黄叶粗粉
5倍1170%热二醇述09]浸演或港漉,潘漉近完全时再加2倍戢加%泠乙醇湊漉
醇提取液
加碳酸钠调pH壬中性■石洱(TC以卜-减床冋收乙醇至含醇量10%-20%..,次f丨吸取上満液
上清液
減压阿收乙醇至无醇味浓縮液
胶状物(叶録素、树脂等)
放冷*用6斗倍量氯伪洗涤1次
氮仿层
(树脂,色未等)
水层
加乙醇至含醇^22%
水层
{糖等水溶性杂质)
氯仿层
I口收氯仿』抽松
拙松物
i芻蠶騙觴腐河購
浓縮液
母液
{息昔,三含毛花泮地苗廿甲、乙、丙)
加入抽松物重量094倍量的蒸馅水及少呈晶种摇匀,箸置4呂小时以I〔.析屁滤取站晶

根据苷甲、乙、丙三者的极性和溶解度的差别,可从总苷中分离出苷丙。三者溶解度见表7-1
氮仿层
\回收氯仿
残酒
住含普札昔乙)
按粗总笳甲*仿・蒸儒水(1:100:500:500)的比例,先将总昔溶于甲酩过滋再醴液中加入鼬和水振摇潇賈待其分层
稀曰醇层
|减压浓编至小体积胸析晶渝滤粗结晶
(主含昔附分昔S
按上述洛剂比例进磷二孵取分离
勦层
\回收勳
稀甲暮层
]减压測请豊析晶南滤
给晶
(主含昔丙)
由于三者的苷元上所含羟基的数目和位置不同,决定了极性由大至小顺序为:苷丙〉苷乙
>苷甲。其中极性小的化合物(苷甲、乙)在非极性溶剂(氯仿)中溶解度大,极性较大者(苷丙)则在极性溶剂(稀甲醇)中溶解度大,据此可用甲醇氯仿水混合溶剂萃取,使
毛花洋地黄苷甲、乙、丙得以分离。

毛花洋地黄苷丙的去乙酰基比较容易,利用氢氧化钙即可水解去掉乙酰基。
毛花洋地黄昔两
按昔丙-甲醇-氢氧化钙-蒸憎水(理:33ml:50-70nig:33ml)的
„比例+先将昔丙洛于甲醇、氢氧化钙溶于水中,分别过滤,混合
混合液(反应液)
静置过夜,测pH,至水解液稍品破件,pH接近了时「水解完毕,|用1%][CL调至中性,过滤
滤液
粗晶
|减压浓缩至小体积,放置过夜,析晶
胶质沉淀
(树豚叶绿素等)
水溶液
氯仿-乙萃取
丈口曰曰
碱性试剂可使强心苷分子中的酰基水解、内酯环开裂,但强心苷分子中的苷键不会被碱水
解破坏,而且氢氧化钙只能水解去掉酰基,并不能破坏强心苷分子中的内酯环。
铃兰中强心苷化合物的提取分离技术
铃兰(Convallariakeiskei)是百合科植物,具有强心、利尿的功效。铃兰含多种强心苷类化学成分,有的强心作用极强,如铃兰毒苷的强心作用约为G-毒毛旋花子苷效价的倍,约为洋地黄毒苷效价的倍,作用迅速,可用于治疗克山病,但毒性性也较大。从铃兰中提取铃兰毒苷的工艺流程如下:

铃兰全草粗粉
]苯-乙醇(9:1)0流提取液
1减压回收洛剂』「水析胶
水层
(水落性杂质)
氯仿层
I浓缩至小体积,用水萃取数次
氯仿层
减压浓缩至小体积,静置15^2011,#滤

从铃兰草中提取分离铃兰毒苷还可采用下列方法:各种强心苷的提取多以醇或稀醇为提取溶剂,虽提取率较高,但提取物中杂质也较多,进一步分离和纯化比较困难。有报道以苯-乙醇、氯仿-乙醇、乙醇-水等混合溶剂以及水分别作溶剂提取铃兰毒苷,并对实验结果进行了比较,结果显示乙醇-水(1:5、1:9)提取率最高,但水溶性杂质最多。苯-乙醇和氯仿-乙醇混合溶剂的提取效率虽较低,但水溶性杂质大大低于前者,综合分析拟定了铃兰毒苷的苯-乙醇(9:1)提取分离工艺路线,并经放大实验得出了本生产工艺简单、生产成本低,可用于工业化生产的结论。
铃兰全贞粗粉
]苯乙醇(9:1)0流
提取液
1凹收溶剂「加水析胶
胶质沉淀
水溶液
]加硫酸亚铁、碳酸钙吸附水溶性杂质,过滤滤液
加活性炭吸附强心昔,过滤
吸芹碳末
80C烘干,苯-乙醇(8:2)加热回流
滤液
提取液
|浓缩至干
铃兰苔粗品
1屮醇虫结品
活性炭