溶液配制.docx

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实验室常用缓冲液配置方案1XTEBuffer
组成浓度:10mMTris-HClImMEDTAPH=:500ml
配制方法:量取下列溶液于500ml烧杯中
1MTris-HClBufferPH=
=
向烧杯中加入约400mlddH20均匀混合;将溶液定容到500ml后,高温高压灭菌;室温保存.
1MTris-HCl()组份浓度:1MTris-HCl配制量:1L配制方法:
。
加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
加入42ml浓盐酸调节所需要的pH值。
将溶液定容至1L。
高温高压灭菌后,室温保存。
()组份浓度:
配制量:1L配制方法:・2H20,置于1L烧杯中。
加入约800ml的去离子水,充分搅拌。
(约20gNaOH)。注意:,EDTA才能完全溶解。
加去离子水将溶液定容至1L。
适量分成小份后,高温高压灭菌。
室温保存。
实验室常用缓冲液配置方案
1)1MTris-HCl(,,)组份浓度:1MTris-HCl
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配制量:1L
配制方法:
。
加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
PH值
浓HCl

约70ml

约60ml

约42ml
按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
将溶液定容至1L。
高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1°C,。
10XTEBuffer(,,&0)组份浓度:100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量:1L
配制方法:
1MTris-HClBuffer(,
,)
100ml
500mMEDTA()
20ml
量取下列溶液,置于1L烧杯中。
向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合。
将溶液定容至1L后,高温高压灭菌。
室温保存。
-HCl()
组份浓度:-HCl配制量:1L
配制方法:
。
加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
。
将溶液定容至1L。
高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随
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温度的变化差异很大,温度每升高1°C,。
3M醋酸钠()
组份浓度:3M醋酸钠
配制量:100ml
配制方法:
・3H0置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离
子水搅拌溶解向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,。
10M醋酸铵
组份浓度:10M醋酸铵配制量:100ml配制方法:
〜200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解。
加去离子水将溶液定容至100ml。
。
密封瓶口于室温保存。注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。
PBSBuffer
组份浓度:137mMNaCl,,10mMNa2HP04,2mMKH2P04配制量:1L
配制方法:
NaCl
8g
KCl

NaHPO
24

KHP0
24

称量下列试剂,置于1L烧杯中。
苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制方法:
说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:
24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
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配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4°C保存。
10%(W/V)SDS组份浓度:10%(W/V)SDS配制量:100ml
配制方法:
称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68C加入溶解

将溶液定容至100ml后,室温保存。
2NNaOH组份浓度:2NNaOH
配制量:100ml
配制方法:
量取80ml去离子水置于100〜200ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100ml。
将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。
:
配制量:100ml
配制方法:
(),均匀混合。
室温保存。
5MNaCl组份浓度:5MNaCl配制量:1L配制方法:
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,加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。
加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。
高温高压灭菌后,4°C保存。
20%(W/V)Glucose组份浓度:20%(W/V)Glucose
配制量:100ml
配制方法:
称取20gGlucose置于100〜200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水后,搅拌溶解。
加去离子水将溶液定容至100ml。
高温高压灭菌后,4C保存。
Solution1(质粒提取用)
组份浓度:25mMTris-HCl(),10mMEDTA,50mMGlucose配制量:1L
配制方法:
1MTris-HCl()
25ml
()
20ml
20%Glucose
()
45ml
dHO
2
910ml
量取下列溶液,置于1L烧杯中。
高温高压灭菌后,4C保存。
使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)。
SolutionII(质粒提取用)
组份浓度:200mMNaOH,1%(W/V)SDS
配制量:500ml
配制方法:
量取下列溶液,置于500ml烧杯中
10%SDS50ml
2NNaOH50ml
加灭菌水定容至500ml,充分混匀
室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌
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KOAc
147g
CHCOOH
3

14)SolutionIII(质粒提取用)组份浓度:3MKOAc,5MCH3COOH配制量:500ml
配制方法:
,置于500ml烧杯中。
加入300ml去离子水后搅拌溶解。
加去离子水将溶液定容至500ml。
高温高压灭菌后,4°C保存。
()组份浓度::1L
配制方法:
・2H20,置于1L烧杯中。
加入约800ml的去离子水,充分搅拌。
(约20gNaOH)。注意:,EDTA才能完全溶解。
加去离子水将溶液定容至1L。
适量分成小份后,高温高压灭菌。
室温保存。
1MDTT组份浓度:1MDTT配制量:20ml配制方法:
,加入到50ml塑料离心管内。
(),。
适量分成小份后,-20°C保存。
10mMATP
组份浓度:10mMATP配制量:20ml
配制方法:
称取121mgNa2ATP・3H20,加入到50ml塑料离心管内。
加20ml的25mMTris-HCl(),搅拌溶解。
适量分成小份后,-20°C保存。

lmol/L亚精胺(Spermidine):,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20C。
lmol/L精胺(Spermine):,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20C。
10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate):,加水定容至
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1L后,。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20C。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):,分成小份贮存于-20C。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管,。
8mol/L乙酸钾(potassiumacetate):,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodiumacetate):,,再加水定容到100ml。
:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(),混合后形成EDTA的三钠盐。・2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/LHEPES:,用NaOH调pH
(-),然后用水定容至100ml。
1mol/LHCl:。
25mg/mlIPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-B-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20C。
1mol/LMgCl2:・6H2O于足量的水中,定容到100ml。100mmol/LPMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20C。
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20mg/ml蛋白酶K(proteinaseK):,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20°C。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase—freeRNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于lml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中()。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用lmol/L的Tris—,于-20C贮存。(配制过程中要戴手套)
5mol/L氯化钠(NaCl):,定容至100ml。10N氢氧化钠(NaOH):
(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
加ol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)
成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖(Ficoll,400型)
2%聚乙烯吡咯烷酮
(PVP-40)
2%BSA(组分V)水
2g
2g
2g
加水至总体积为100ml
%X—gal(5-溴-4-氯-3-吲哚一B-半乳糖苷):溶解25mg的X—gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20C。100XDenhardt试剂(Denhardt'sregent)
依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20C贮存。
10X标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端连接)
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
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-HCl
100mmol/LMgCl2
100mmol/LDTT
5ml1mol/L贮液
1ml1mol/L贮液
1ml1mol/L贮液
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2mmol/LATP
5mmol/L盐酸亚精胺(可选)(组分V)(可选)
水
200ul100mmol/L贮液50ul1mmol/L贮液

将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20°C。
100mmol/LdNTP溶液(dNTPsolutions)
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80C可贮存至少6个月。10mmol/LdNTP混合液
成分及终浓度
配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/LdATP10mmol/LdCTP10mmol/LdGTP10mmol/LdTTP水
2ul100mmol/LdATP贮液2ul100mmol/LdCTP贮液2ul100mmol/LdGTP贮液2ul100mmol/LdTTP贮液12ul
20%PEG8000/
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20%聚乙
二醇

水
20g
50ml5mol/
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20XSSC
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L柠檬酸三钠(二水)
3mol/L氯化钠
水


溶解柠檬酸三钠(二水),,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水