纳豆的发酵及纳豆芽孢杆菌的分离纯化.docx

该【纳豆的发酵及纳豆芽孢杆菌的分离纯化 】是由【游园会】上传分享，文档一共【6】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【纳豆的发酵及纳豆芽孢杆菌的分离纯化 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。12食品养分4班
莫沛伦
202330600816
综合性试验报告
试验工程名称:纳豆的发酵及纳豆芽孢杆菌的分别纯化试验工程性质:综合性试验
所属课程名称:食品微生物班 级:12食品养分4班
学 号:
2023年05月10日
摘要:成品纳豆的制备及纳豆芽胞杆菌的分别纯化;利用微生物的陈代谢发
酵黄豆制备纳豆制品;革兰氏染色法可将细菌区分为革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性性细菌两大类,是由这两类菌的细胞壁构造和成分的不同所打算的。
关键词:纳豆的制备纳豆芽胞杆菌分别纯化革兰氏阳性细菌革兰氏阴性性细菌
前言:
纳豆,大豆经纳豆菌发酵而成,是一种安康食品。几千年间传播全世界各
地,尤其是整个东南亚的人们对纳豆的作用高度认可,食用者众多,日本人尤
其热衷这种美味保健食品。而纳豆制成的保健产品、生物制剂被人们广泛承受。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保存初染时的颜色,呈现蓝紫色。
试验材料与方法
试验材料
黄豆:50g~100g/组;饭盒〔带盖〕;接种用纳豆产品、筷子、酱油、芥末
250ml三角瓶〔带玻璃珠〕、250ml三角瓶、试管、100ml量筒、不锈钢锅、电磁炉、试管架、玻璃棒、电子天平、大塑料筐、称量纸、不锈钢大口盅、纱布、大漏勺、1ml枪头、移液枪、橡皮筋、牛皮纸〔报纸〕试管塞、三角瓶塞、标签纸、-、载玻片、显微镜、酒精灯、接种环、无菌平皿、洗瓶、吸水纸、擦镜纸、废液缸
10%NaOH、5%HCl、肉汤培育基、结晶紫染色液、卢戈碘液、95%乙醇、番红染色液、香柏油、二甲苯、
黄豆
浸泡
成品
蒸煮
稀释
冷却
涂布 培育
接种
观看。
发酵
试验流程:
12食品养分4班
莫沛伦
202330600816
固体发酵接种
称取黄豆〔50g~100g/组〕,洗净、浸泡过夜,沸水煮沸20min,铺至纱布自然冷却,拌入成品纳豆〔10%的接入量〕,拌匀,分装至小碗自然发酵2d
〔30℃〕。
牛肉膏蛋白胨的制备
在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,参加琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%~,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌:、121摄氏度维持15~30分钟。
无菌水的制备
制作无菌水。90ml装进三角瓶,加玻璃珠4颗,9ml装进试管8支。塞紧。用牛皮纸包住。高温蒸汽灭菌
纳豆芽胞杆菌的分别纯化
称取发酵后成品10g,放入装有90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中,振荡摇匀,将细胞分散。承受10倍稀释法,将菌悬液稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8不同浓度的菌悬液;用无菌吸管分别吸取10-6、10-7、
10-()滴在平板培育基外表中间位置,用无菌涂布器涂布均匀,37℃培育2d。
纳豆芽胞杆菌的观看
菌落形态:肉眼观看;[1]
12食品养分4班
莫沛伦
202330600816
外形
边缘
外观形态
外表
颜色
透亮图
致密度
圆形
不规章
中间凸起
皱褶
白色
不透亮
致密
革兰氏染色及芽胞观看:
涂片→枯燥→固定→染色→〔初染→媒染→脱色→复染〕→镜检
革兰氏染色方法
1 涂片:取灭过菌的载玻片于试验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中心,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。
2枯燥:将标本面对上,手持载玻片一端的两侧,留神地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。3固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片反面加热触及皮肤,不觉过烫为宜〔不超过60℃〕,放置待冷后,进展染色。
初染:在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液掩盖涂片,染色约
1min。
水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。
媒染:用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液掩盖涂片,染色约1min。
水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。
脱色:斜置载玻片,滴加95%乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色为止,大约需时20-30S,随即水洗。
复染:在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴,使染色液掩盖涂片,染色约1min。
水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。
用显微镜观看:纳豆芽胞杆菌为紫色。证明:纳豆芽胞杆菌则革兰氏染色阳性菌
菌落数
12食品养分4班
莫沛伦
202330600816
10-6
10-7
10-8
大于300
大于300
67个菌落
留意事项:
灭菌锅的使用留意事项;
待灭菌的物品放置不宜过紧。
必需将冷空气充分排解,否则锅内温度达不到规定温度,影响灭菌效果。
灭菌完毕后,不行放气减压,否则瓶内液体会猛烈沸腾,冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。
装培育基的试管或瓶子的棉塞上,应包油纸或牛皮纸,以防冷凝水入内。
革兰氏染色的留意事项;
革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定。
染色过程中勿使染色液枯槁。用水冲洗后,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果。
选用幼龄的细菌。G+菌培育12h-16h,培育24h。假设菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反响。
梯度稀释时操作。
称取发酵后成品10g,放入装有90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中,振荡摇匀,将细胞分散。
用一支1mL无菌吸管从中吸取1mL菌悬液参加成有9mL无菌水的大试管中充分摇匀,然后用无菌吸管从今吸管中吸取1mL参加另一支盛有9mL无菌水的试管中,混合均匀,以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8不同浓度的菌悬液。
结果与分析
12食品养分4班
莫沛伦
202330600816
结论1:纳豆芽胞杆菌由镜检结果得:革兰氏阳性菌。杆状。
分析:G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保存初染时的颜色,呈现蓝紫色。
结论2:菌落形态
外形
边缘
外观形态
外表
颜色
透亮图
致密度
圆形
不规章
中间凸起
皱褶
白色
不透亮
致密
结论3:菌落数
10-6
10-7
10-8
大于300
大于300
67个菌落
所以发酵后的10g成品纳豆含菌,*108个
参考文献
[1]李小丽,彭惠惠,唐欣昀纳豆芽孢杆菌的分别纯化及鉴定(安徽农业大学生命科学学院,合肥230036)
12食品养分4班
莫沛伦
202330600816