纳豆发酵及纳豆芽孢杆菌分离纯化.docx

综合性实验报告
实验项目名称:纳豆的发酵及纳豆芽孢杆菌的分离纯化
实验项目性质:综合性实验
所属课程名称:食品微生物
班级: 12食品营养4班
姓名:莫沛伦
学号:201230600816
指导老师:莫美华
2014年05月10日
摘要:成品纳豆的制备及纳豆芽胞杆菌的分离纯化;利用微生物的新陈代谢发酵黄豆制备纳豆制品;革兰氏染色法可将细菌区分为革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性性细菌两大类,是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
关键词:纳豆的制备纳豆芽胞杆菌分离纯化革兰氏阳性细菌革兰氏阴性性细菌
前言:
纳豆,大豆经纳豆菌发酵而成,是一种健康食品。几千年间传播全世界各地,尤其是整个东南亚的人们对纳豆的作用高度认可,食用者众多,日本人尤其热衷这种美味保健食品。而纳豆制成的保健产品、生物制剂被人们广泛接受。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时的颜色,呈现蓝紫色。
实验材料与方法

黄豆:50g~100g/组;饭盒(带盖);接种用纳豆产品、筷子、酱油、芥末
250ml三角瓶(带玻璃珠)、250ml三角瓶、试管、100ml量筒、不锈钢锅、电磁炉、试管架、玻璃棒、电子天平、大塑料筐、称量纸、不锈钢大口盅、纱布、大漏勺、1ml枪头、移液枪、橡皮筋、牛皮纸(报纸)试管塞、三角瓶塞、标签纸、-、载玻片、显微镜、酒精灯、接种环、无菌平皿、洗瓶、吸水纸、擦镜纸、废液缸
10%NaOH、5%HCl、肉汤培养基、结晶紫染色液、卢戈碘液、95%乙醇、番红染色液、香柏油、二甲苯、
黄豆浸泡蒸煮冷却接种发酵成品稀释涂布培养观察。
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固体发酵接种
称取黄豆(50g~100g/组),洗净、浸泡过夜,沸水煮沸20 min,铺至纱布自然冷却,拌入成品纳豆(10%的接入量),拌匀,分装至小碗自然发酵2 d(30℃)。

在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%~,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌:、121摄氏度维持15~30分钟。

制作无菌水。90ml装进三角瓶,加玻璃珠4颗,9ml装进试管8支。塞紧。用牛皮纸包住。高温蒸汽灭菌
纳豆芽胞杆菌的分离纯化
称取发酵后成品10 g,放入装有90 mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中,振荡摇匀,将细胞分散。采用10倍稀释法,将菌悬液稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8不同浓度的菌悬液;用无菌吸管分别吸取10-6、10-7、10-( ml)滴在平板培养基表面中间位置,用无菌涂布器涂布均匀,37℃培养2 d