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运用高效液相色谱法测定黄精丸中阿魏酸的含量
黄精丸是由当归黄精2味组成的中成药,具有补气养血等功效,用于气血两亏,身体虚弱,腰腿无力,倦怠少食。其中黄精具有补气养阴,健脾润肺,延年驻颜之功[1];当归性甘、辛,温。归肝、心、脾经。为伞形科植物的干燥根,是临床常用中药,有活血调经、润肠止痛之功效[2],当归含有内酯类、生物碱类、有机酸类或酚类以及中性油类等多种成分[3].在2010年版中国药典一部中,阿魏酸作为当归质量把握的指标成分。本文接受HPLC的方法测定黄精丸中的阿魏酸含量。
1仪器、试药及样品
Agilent1200高效液相色谱仪,Agilent1260DAD检测器,Agilent1200Als自动进样器,AgilentChemStation工作站;分析天平(北京Sartorious仪器有限公司);KQ-500型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司).
对比品阿魏酸(批号110773-201012)购买于中国食品药品检定争论院,水为超纯水,乙腈为HPLC级(赛默飞世尔科技有限公司),磷酸为分析纯(北京化工厂).
黄精丸3批(批号:13010113、13010114、13010115)市售。
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2溶液的配制

%,置1000mL容量瓶中,加甲醇适量使其溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液(-1).

取本品大蜜丸,剪碎,,精密称定,加等量的硅藻土研碎,过40目筛,混合均匀,置圆底烧瓶中,精密加70%甲醇20mL,称定重量,加热回流30min,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,静置,取上清液滤过,取续滤液,用微孔滤膜()滤过,取续滤液,即得。

按处方配比,取除当归的黄精药材,粉碎成细粉,过40目筛,按""项下方法配制出对比品溶液。
3色谱条件
色谱柱:AglientTC-C18(,5m)分析柱;流淌相:以乙腈-%磷酸溶液(20∶80);检测波长316nm;柱温35℃;-1;进样量:10L.
在上述色谱条件下,精密吸取供试品溶液、对比品溶液、阴性样品溶液各10L,分别注入色谱仪,结果表明样品中其他成分对阿魏酸的测定无干扰,见图1.
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4方法学考察

-1对比品溶液1,3,5,7,9L,注入液相色谱仪,以进样量(g)对色谱峰面积积分值(Y)作标准曲线,并进行回归,计算得回归方程为:
Y=-=~。

精密称取黄精丸供试品(批号13010113),照""项下方法,分别在0、1、3、5、8、12、24h进样测定,以峰面积计算,%,结果表明黄精丸自制备在24h内稳定。

取同一批号的黄精丸样品(批号13010113)1份,按""项下方法制备和测定,含量测定方法按拟定的色谱条件连续进样6次,以峰面积计算,%,小于3%,精密度良好。

取同一批号的黄精丸样品(批号13010113)6份,按""项下方法制备和测定,含量测定方法按拟定的色谱条件进行测定,测得阿魏酸的平均含量(n=6)-1,%,结果表明重复性良好。
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(批号13010113,-1)6份,,,按正文供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,按正文色谱条件测定其含量,结果平均回收率(n=6)%,%,表明本试验具有良好的回收率。
5样品含量测定
精密称取黄精丸样品3批,每批两份,按""项下方法制备供试溶液,按拟定的色谱条件进行测定。按外标法计算阿魏酸的含量,结果见表1.
6讨论
不同的提取方法,溶剂及提取时间对试验结果有着较大影响。本试验对不同的提取方法(超声提取、回流提取)、提取时间(20min、30min、40min)及溶剂(100%甲醇、70%甲醇)进行了考察,试验结果显示,回流加热提取率高,70%甲醇比100%甲醇提取的含量要高,回流加热提取30min,40min的含量比回流加热提取20min的含量高,但回流加热提取30min与40min,信号已无差别,所以提取工艺选择回流加热时间为30min,提取溶剂为70%甲醇。
接受中国药典方法以乙腈-%磷酸溶液(20∶80)为流淌相对阿魏酸进行HPLC法测定,分别较好,基线较低,节省了时间与溶剂,保持了柱效的稳定性,分别较理想。
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本法用HPLC法测定黄精丸中阿魏酸,样品处理方法简洁,稳定,重复性良好,可用于黄精丸药丸的质量把握。
参考文献
[1]魏宪纯,李明杰,张春蕾。九转黄精丸对年轻小鼠皮肤及血清中脂褐质含量影响的争论[J].中医药信息,2009,26(6):51-52.
[2]国家药典委员会。中华人民共和国药典[M].第一部。北京:中国医学科技出版社,2010:124.
[3]杨帆,肖远胜,章飞芳,等。当归化学成分的HPLC-MS/MS分析[J].药学学报,2006,41(11):1078-1083.