实 验 分子荧光法测定硫酸奎宁的含量.doc

实验分子荧光法测定硫酸奎宁的含量
一、实验目的
;熟悉仪器的操作步骤;
:(即确定最大的激发λEX和发射λEm)
(标准曲线法)
二、实验原理
硫酸奎宁,是喹啉类衍生物,能与疟原虫的DNA结合,形成复合物抑制DNA的复制和RNA的转录,从而抑制原虫的蛋白合成。适用于氯喹和耐多种药物虫株所致的恶性疟。
硫酸奎宁分子量:。分子式:(C20H24N2O2)2·H2SO4·2H2O
它是强荧光物质,有两个激发波长250 nm和350 nm,荧光发射峰在450 nm。在低浓度时,荧光强度与荧光物质量浓度呈正比:If=kC
三、实验内容

仪器:
日本日立公司F-4600 荧光分光光度计。
试剂:
(1)10μg·mL-1硫酸奎宁标准储备液: g硫酸奎宁, mol·L-1 H2SO4溶液溶解,全部转移至l00ml容量瓶中, mol·L-1 H2SO4溶液稀释至刻度,摇匀。 mL
容量瓶中, mol·L-1H2SO4溶液稀释至刻度,摇匀。
(2) mol·L-1 H2SO4溶液1000mL:取浓H2SO4 ,即得。(浓硫酸溶质质量分数为百分之98,密度=^3)
四、实验步骤

取5只25mL的容量瓶,·mL-,
-、、、, mol·L H2SO4溶液稀释至刻度,摇匀。分
别为标0,标1,标2,标3,标4,标0做空白试剂。

(1)检查仪器所有电源开关处于关闭状态,然后通电;
(2)打开主机开关,电脑开关等;
(3)通过电脑进入分析程序
:()
(1)仪器正常后设定试验参数,更改实验名称等;
(2)进行预扫后,开始对所有标液及样品扫描;画出标准曲线
A)将λEX固定在350 nm,选择合适的实验条件,在400~600 nm范围内扫描即得
荧光发射光谱(可排除λEX的干扰),从谱图找出最大λEm值;
B)将λEM固定在450 nm,选择合适的实验条件,在200~400 nm范围内扫描即得荧光激发光谱(可排除λEM的干扰),从谱图找出最大λEX值.
C) 绘制标准曲线
将激发波长λEX