未知菌的鉴定.doc

未知菌的鉴定
“受试菌的分离纯化及初步鉴定”实验报告和总结
田博书2009302630018,崔明曜2009302630019
杨帆2009302630023,彭慧2009302630024
(学号排序,贡献同等)
武汉大学生命科学学院生命科学与技术基地班,湖北,430072
【摘要】在本次实验中,我们首先从空气中分离出了一未知菌,纯培养之后进行了一系列的实验,包括对其形态、生理生化及16S rRNA基因等的测定,并在此基础上推断未知菌的科属甚至种。
【关键词】受试菌、革兰氏染色、鞭毛染色、生理生化实验
【前言】人类生活的环境中充满了各类各色的微生物,以细菌居多,霉菌和放线菌次之。在充满众多不同的微生物的环境中培养和分离单个菌株,用菌落形态特征观察,革兰氏染色,鞭毛染色和理化试验等方式检验其性质,通过16s rRNA序列的PCR分析和对比辅助判断,以此学习熟悉和巩固微生物实验的基本操作原理和技术。对今后的应用和科研很有帮助。
一、实验器材
1. 菌种
受试菌
2. 培养基
固体淀粉培养基、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基
3. 溶液、试剂及器材
草酸铵结晶紫染液、95%乙醇、沙黄复染液染剂、卢戈氏碘液、硝酸银染液A/B液、蒸馏水;
显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、盖玻片、滤纸、酒精灯、双层瓶(装有香柏油和二甲苯)
二、实验步骤
革兰氏染色
1. 取受试菌活跃生长期部位按常规方法涂片;
2. 滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位,染色1~2min后倾去染液,水洗至流出水无色;
3. 先用卢戈氏碘液冲去残留水迹,再用碘液覆盖1min,倾去碘液,水洗至流出水无色;
4. 将玻片上残留水用吸水纸吸去,在白色背景下用滴管流加95%乙醇脱色。当流出液无色是立即用水洗去乙醇;
5. 将玻片残留水用吸水纸吸去,用沙黄复染液染色2min,吸去残水晾干;
6. 油镜观察:
在保证了阴性对照和阳性对照结果正常的情况下,受试菌镜检显红色,
为革兰氏阴性菌。
鞭毛染色(硝酸银法)
1. 制片:滴一滴水到洁净载玻片一端,用接种环挑取部分菌体,将菌体轻轻磕入水滴中,不能剧烈震荡,倾斜玻片,使菌悬液缓缓流向另一端,用吸纸吸去多余菌悬液,自然干燥;
2. 染色:滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液。用硝酸银B
液洗去残留水分后,在滴加B液覆盖菌面数秒至一分钟,可用微火加热,当菌面出现银膜时,立即用蒸馏水冲洗,自然干燥;
3. 镜检:用油镜镜检观察。
淀粉水解试验
1. 将固体淀粉培养基溶化后冷却至50℃左右,无菌操作制成平板;
2. 挑取菌体在平板上划线接种(与枯草芽孢杆菌和大肠杆菌同时进行试验),并标记;
3. 将平板倒置在适宜环境下培养一段时间后,观察细菌的生长情况,打开平板盖子,
滴入少量卢戈氏碘液于平板中,轻轻旋转平板使碘液均匀铺满整个平板:
如菌苔周围出现无色透明圈,说明淀粉已被水解,为阳性。
糖发酵试验
1. 取半固体葡萄糖发酵培养基和半固体乳糖发酵培养基各一支(实验时与大肠杆菌和
普通变形菌一起进行,故各三支);
2. 半固体穿刺接种受试菌,标记后置于适宜环境培养;
3. 观察培养基颜