一种未知真菌的分类鉴定.doc

一株丝状真菌的分类鉴定与特性研究生物系王凡指导老师赵文婧韩建荣摘要;运用载片观察法和菌落平板培养法对本实验室分离到的丝状真菌Mars进行了培养观察,并与标准菌球孢白僵菌(Beauveriabassiana),初步鉴定Mars可能属于白僵菌属(Beauveria)。,。另外,,。并进行了室内感染松毛虫毒力的比较,。关键词:丝状真菌;观察鉴定;胞外蛋白酶;产孢量本实验室分离到一株丝状真菌Mars,它在Mas培养基上能产生明显的溶钙圈,在牛奶培养基中培养能导致酸凝,并且使培养基由白色变为紫红色。该菌株在多种培养基上培养都没有发现有性孢子,初步鉴定是一种半知菌。本实验对该菌株进行了形态观察,并与购于中科院的标准菌株球孢白僵菌(Beauveriabassiana),以确定该菌株的准确分类地位。另外,根据球孢白僵菌所具有的一些生理生化特征,本实验对Mars的产孢量,胞外蛋白酶的活力及毒力等特性进行了初步研究。1材料与方法供试菌株Mars菌株,保存在PDA斜面上,由山西大学微生物实验室提供。标准菌株球孢白僵菌(Beauveriabassiana),保存在查氏斜面上。,吐温-100,磷酸缓冲溶液等。,超净工作台,恒温培养箱,电子显微镜,电子天平等。[1~2]:马铃薯培养基(PDA),添加了蛋白胨的马铃薯培养基(PPDA),查氏培养基(CA培养基),明胶琼脂培养基:平板由1﹪﹪的琼脂配成。、CA、PPDA平板上,25℃黑暗培养观察菌落形态。[1]将圆形滤纸铺于培养皿的底部,其上放一U形玻棒及盖玻片和载玻片各一片,盖好培养皿盖,灭菌;用无菌玻棒直接蘸取已融化的固体培养基滴于培养皿中载玻片的中央;用接种环取少量孢子接种于载玻片上培养基小块的四周,加上盖玻片,并略向下轻压;为防止培养过程中培养基干燥,可于培养皿中的滤纸圆片上滴加无菌的20%甘油液3-4毫升,盖好皿盖;将盖好的培养皿置适宜的温度下培养,定期取出,观察显微结构。(使用明胶琼脂平板法[3])平板由1﹪﹪的琼脂配成,各待试菌株配成1×108孢子/mL的孢子悬液,用微量取样器取25μL点滴在平板中央。每待试菌株6次重复,25℃黑暗培养三天,用15%的HgCl2(溶于2mol/L的盐酸)溶液处理,待菌落周围显现清晰的透明环后,倒去HgCl2,用直尺测量纵横两个方向的透明环直径和菌落直径,以透明环和菌落直径平均值之比作为胞外蛋白酶产酶量的指标。[4]、PPDA培养基、CA培养基上,25℃黑暗培养10d后,每个处理设置3个重复,在菌落核心至1/,﹪吐温水的500mL三角瓶