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枸杞多糖
1 前言
2 实验目的
3 实验原理
萃取是有机化学实验室中用来提取和纯化化合物的手段之一。通过萃取,能从固体或液体混合物提取出所需的化合物。它的基本原理是利用化合物在两种不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度或分配系数的不同,使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中。经过反复的多次萃取,将绝大部分的化合物提取出来。萃取常见的有液-液萃取和液-固萃取。在本次实验中,是利用水溶液从枸杞子粉末中提取出多糖类化合物,属于液-固萃取。
多糖类化合物的溶剂提取,溶剂的选择是根据原料中被提成分,即多糖类化合物的极性、共存杂质的理化特性,遵循相似相溶的原则,使有效成分从原料固体表面或组织内部向溶剂中转移的传质过程。一般而言,分子的极性依据活性基团的种类和数目、分子的缔合程度大小进行判断,分子中含有羟基或羧基基团越多,极性就越大,亲水性就越强;反之极性就越小,亲脂性越强。要把存在于植物细胞中各种水溶性多糖完全地提取出来,一般要求将试样尽可能地粉碎。根据枸杞果实细胞的特点及其含有大量的还原糖(40%~50%)不宜粉碎等情况,采用了机械成浆或剪碎成细粒后再行提取。

常用的去除多糖中蛋白质的方法有:Sevage法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法,这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀。从资料知,%,这些蛋白质无论是游离态或以糖肽结合态进入热水中,在沉淀多糖的浓乙醇溶液中均被沉淀下来。为了除去能与多糖一起沉淀的游离蛋白质,许多人在提取分离流程中采用了Sevage法脱蛋白质手续。Sevage方法脱蛋白效果较好,它是用氯仿:戊醇或丁醇,以4:1比例混合,加到样品中振摇,使样品中的蛋白质变性成不溶状态,用离心法除去。
Sevage法:利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点,将提取液与Sevage试剂[氯仿:正丁醇=5:1(V/V)]5:1 混合,振荡,离心,变性后的蛋白质介于提取液与Sevage 试剂交界处。此法的优点是条件温和,不会引起多糖的变性。
乙醇沉淀多糖的适宜浓度
5 实验仪器及试剂
:研钵、蒸馏烧瓶、球形冷凝管、酒精灯
:宁夏枸杞(为宁夏中宁产)、精河枸杞(为新疆精河县产)、a-无水葡萄糖、95%乙醇、无水乙醇、浓硫酸、丙酮、三氯甲烷和甲醇 6 实验步骤
枸杞的预处理:称取适量枸杞子置干燥箱中于60℃烘干,取出后放入干燥器中24h;
脱脂:取10g干燥后的枸杞研碎置普通回流装置中,加入氯仿:甲醇(2:1)60℃回流脱脂2次,每次2h,滤出溶剂;
图1

采用苯酚一硫酸比色法,a一无水葡萄糖作为标准品。精密称取葡萄糖对照品50mg,置105℃(i干燥箱中干燥至恒重后置于50mL容量瓶中,加水溶解至刻度,、,,(即得5个浓度
02mg/mL,04mg/mL,06mg/mL,08mg/mL,00mg/mL),C1=====1.
加水稀释至刻度,各取1 mL于10mL比色管中,分别加入5%苯酚溶液1 mL,摇匀,匀速加入5mL浓H2SO4,冷水浴冷却至室温。以蒸馏水同法做空白