肝癌细胞甲胎蛋白mRNA 转染活化的B 淋巴细胞诱导细胞毒性T 淋巴细胞的抗肿瘤效应.pdf

中华消化外科杂志 2013年 1月第 12卷第 1期 ChinJDigSurg,January2013,, ·53·
·论著·
肝癌细胞甲胎蛋白 mRNA转染活化的
B淋巴细胞诱导细胞毒性 T淋巴
细胞的抗肿瘤效应
贺涛张玲黄长山崔宏王云检韩风
【摘要】目的研究肝癌细胞 AFPmRNA转染活化的 B淋巴细胞诱导细胞毒性 T淋巴细胞的抗肿
瘤作用。方法分离、纯化 B淋巴细胞,重组人可溶性 CIM0配体(sCD40L)活化人外周血 B淋巴细胞;构
建 PGEM4Z/AFP/A64EGFP质粒,加入 T7RNA聚合酶,转录具有 PolyA尾端的 AFPmRNA;将提取的 AFP
mRNA电转染 B淋巴细胞作为实验组,选取 GAPDHmRNA转染者作为阴性对照组,未转染的 B淋巴细胞
作为空白对照组。检测各组 B淋巴细胞表面抗原提呈细胞标记分子(CD19、CD20、CD21、CD40、CD80、
CD83)及主要组织相容性抗原的表达情况;将 3组 B淋巴细胞与 T淋巴细胞分别按 1∶40,1∶20,1∶10和 1∶5
的比例混合培养、诱导、扩增抗原激活 T淋巴细胞并测定吸光度值以检测 T淋巴细胞增殖能力;以 T淋巴
细胞作为效应细胞,肝癌细胞系 SMMC7721为靶细胞,检测 T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤活性。两两比较
采用配对 t检验,多组比较采用单因素方差分析,方差不齐时采用 Tamhane′sT2检验。结果实验组 B淋
巴细胞表面标志分子 CD19、CD20、CD21、CD40、CD80和 CD83的表达水平分别为 74±11、78±8、80±10、
90±11、82±6、56±5,显著高于阴性对照组的 51±5、60±7、53±5、73±8、50±5、49±6,以及空白对照组的
46±3、54±5、41±3、56±5、52±6、21±4(t=、、、、、,、、
、、、,P<)。实验组吸光度值显著高于阴性对照组和空白对照组(t=
、、、,、、、,P<)。当 T淋巴细胞与肝癌细胞系
SMMC7721按照 40∶1、20∶1和 10∶1的比例混合后,实验组 B淋巴细胞诱导产生的 T淋巴细胞对肝癌细胞
的杀伤率分别为 43%±4%、32%±4%和 22%±3%,显著高于阴性对照组的 15%±5%、7%±3%和 6%±
2%,以及空白对照组的 7%±3%、8%±3%和 9%±4%(t=、、,、、,
P<)。结论肝癌细胞 AFPmRNA转染的 B淋巴细胞可有效诱导T淋巴细胞杀伤肝癌细胞。
【关键词】肝肿瘤; 甲胎蛋白; 淋巴细胞
AntitumorefficiencyofcytotoxicTlymphocyteinducedbyactivatedB lymphocyteafterhepatocellular
carcinomaalphafetoproteinmRNA trans