角膜基质诱导胚胎干细胞定向分化的初步实验研究.pdf

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角膜基质诱导胚胎干细胞定向分化的初步实验研究



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葛坚陈家祺‘
。中山医科大学中山眼科中心,广州
中山医科大学实验动物中心,广州
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目的:探索角膜基质接触诱导胚胎干细胞,.细胞定向分化的可能性。
方法:分别在去上皮的新西兰白兔表层角膜缘基质上、
胞,棵鼠皮下移植使其形成复层细胞,一段时间后,行扫描电镜和光镜观察。
结果:细胞在新鲜表层角膜缘基质上增殖缓慢,~
态单一,体积较正常细胞大,电镜下细胞核已演变为细长形,移植到棵鼠皮下周形成上皮样
,而角膜基质非上皮面的细胞仍保持其小细胞状态不变。晶
状体上皮细胞与细胞共培养只能延缓其分化时间,不能诱导其定向分化。
结论:表层角膜缘基质具有诱导细胞定向分化的潜能,体外培养条件下可能不发生晶状体诱
导的第三级胚胎诱导。眼科学报:—。
关键词:胚胎干细胞

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★本课鼯受广东省自然科学基金赍助,编号:
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眼科学报年第卷第期;..
, 类病因所致的组织器官缺损或功能障碍是人类状体囊镊撕取晶状体囊皮,无菌冲洗后,剪成
口健康面临的主要危害之一,移植手术是根本的组织片,置于培养瓶内,置%、℃培养
治疗手段,受到了供体缺乏的严重制约,新近问世的箱中小时后,添加,培养液,细胞覆盖大部分
胚胎干细胞;,细胞为人们孔底后,消化传代,隔日换液一次,天细胞长满瓶
通过组织工程向临床提供广源、实用的原材料创造底,一部分继续传代或冻存,一部分与细胞共培
了条件,目前,诱导细胞定向分化的研究已取得养。
了有意义的进展,
的报道,本研究采用基质接触诱导的方法,探索诱导细胞培养:以×个细胞/密度将
细胞定向分化为角膜缘干细胞的可能性。.,细胞接种于预植小鼠胚胎成纤维细胞饲养层
的培养瓶中,置%、℃培养箱内培养,编日换
材料和方法液一次,一般~天以:传代一次。诱导分化前
撤去饲养层细胞,在培养液中加入×/的
.材料,传—代,以除去饲养层细胞。
细胞和组织:.,细胞由中山医科大学病理角膜缘表层基质和角膜基质对细胞的诱导
生理学教研室李树浓教授提供。小鼠胚胎成纤维细作用:以×细胞/
胞取白孕娠天的昆明鼠胚胎。含表层角膜缘基质粘附有预处理角膜组织片的四孔培养板中,用
用刀切自健康新西兰白兔的去上皮角膜。晶状培养液,置% 、℃培养箱中培养,细胞
体上皮细胞取白健康新西兰白兔。形成集落后,部分固定后行形态学观察,另一部分移
试剂和器械:公司植在裸鼠皮下,继续生长。
产品, ’、白血病抑晶状体细胞饲养层对细胞的诱导作用:在
制因子,、、胰蛋形成单层晶状体细胞上,以×个细胞/瓶密度
白酶均为公司产品。塑料培养瓶、四孔种植.,细胞,每天于倒置显微镜下观察,每—
培养板均为公司