蛋糕实验.doc

蛋糕实验
浙江农林大学
食品专业模块实验课程
实验指导书
适用班级:( 食品09
农业与食品科学学院
2011年 11 月 18 日
)
实验一糕点类食品中菌落总数的检测
一、实验目的
通过检测糕点类食品中菌落总数,熟悉新产品开发及其食品检验中菌落总数的检验。
二、实验器具及试剂

微生物实验室常规灭菌及培养设备:恒温培养箱(36℃,30℃)、冰箱(2℃ 5℃)、恒温水浴箱(46℃);天平:、均质器、振荡器、无菌吸管:1ml()、10ml()或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶:容量250ml、500ml、无菌培养皿:直径90mm、pH计或pH比色管或精密pH试纸、放大镜或(和)菌落计数器或pertrifilmTM1)自动判读仪。糕点类食品若干。

平板计数琼脂培养基;
无菌生理盐水:,121℃高压灭菌15min。
三、实验内容
(一)平板菌落计数法
菌落总数的检验程序见图一:
图一菌落总数的检验程序
操作步骤:
样品的稀释:固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~1000r/min均质1min~2min,或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,支撑1:10的样品均液。
液体样品:以无菌习惯吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品均液。
用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品均液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品均液。
,制备10倍系列稀释样品均液,每递增稀释一次,换用1次1ml无菌吸管或吸头。
根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品
均液(液体样品可包括原野),在进行10倍递增稀释时,吸取1ml样品均液于无菌平皿内,每个稀释度做2个平皿。同时,分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
及时将15ml~20ml冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
培养
琼脂凝固后,将平板翻转,36℃培养48h,水产品30℃培养72h。
如果样品中可能含有在轻质培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄琼脂培养基(约4ml),凝固后翻转平板,。
菌落计数
可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(CFU)表示。
选取菌落数在30CFU~300CFU之间,无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数,低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落。
当平板上出现菌落见无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
结果的表述
菌落总数的计算方法
若只有一个稀释平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(或每毫升)中菌落总数结果。
若有两个连续稀释的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:
N=∑C/(n1+)d????????????????????(1)
N-----样品中的菌落数
∑C---平板(含适宜菌落数的平板)菌落数之和;
n1----第一个适宜稀释度平板上的菌落数;
n2----第二个适宜稀释度平板上的菌落数;
d-----稀释因子(第一稀释度);
若所有稀释度的平板上的菌落数均大于300,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
。
若所有稀释度(包括液体样品原液)平板