琥珀酸脱氢酶的作用
及其竞争性抑制
生物化学与分子生物学系
陈园园
实验 7
了解琥珀酸脱氢酶的作用及
酶促反应中的竞争性抑制作用
实验目的
竞争性抑制作用
抑制剂和底物的结构相似,
能和酶的底物分子竞争
与酶的活性中心相结合,
从而阻碍酶与底物结合
形成中间产物。
酶活性位点
抑制程度取决于抑制剂和底物对酶的相对亲和力
以及抑制剂和底物浓度比。
加大底物浓度可减弱甚至解除抑制作用。
实验原理
延胡索酸
琥珀酸
还原型甲烯蓝
(白)
琥珀酸脱氢酶
甲烯蓝
(蓝)
E + S ES E + P
琥珀酸
丙二酸
E
+
I
EI
琥珀酸脱氢酶
FAD FADH2
操作步骤
1、酶提取液的制备
1~ g 兔肌肉(剪碎)+海砂少许(1/3匙)
+2ml 磷酸盐缓冲液(1/15 mol/L),研磨成糊状,
然后再加10ml 磷酸盐缓冲液(1/15 mol/L)混匀。
2、纱布过滤(双层)
3、取小试管五只,按书上P40表格加入各试剂。
最后加石蜡隔绝空气,37℃水浴保温。
每间隔10~15min观察一次结果,并记录。
实验结果
编号
1
2
3
4
5
酶
有
有
有
有
无
底物
+++
+++
+++
+
+++
抑制剂
-
+++
+
+++
-
结果
注意事项
注意区分肌肉与筋膜;
家兔肌肉必须充分剪碎碾磨,海砂不可加太多;
12 ml缓冲液要分次加入,不可一次性加入;
碾磨器械、纱布要及时清洗,纱布要洗干净晾干;
滴加试剂时,一定要看清试剂的名称和浓度;
滴加液体石蜡时沿着管壁倾斜加入,盖住液面即可;
观察结果时不能振摇试管,避免甲烯白重新氧化变蓝;
实验完成后试管要用皂粉清洗。
改良Mohum法测定 鼠肝谷-丙转氨酶(GPT)活性
实验 22
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