离体蛙心灌流.ppt

离体蛙心灌流
【目的要求】
1、学习斯氏离体蛙心灌流法。
2、观察离子及药物等对离体心脏活动的影响。
【基本原理】
心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境(如Na+,K+,Ca2+等的浓度及比例、pH值和温度),内环境的变化直接影响到心脏的正常节律性活动。
将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中(任氏液Ringer solution),在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。
离子对心脏活动的影响
改变任氏液的组成成分,离体心脏的活动就会受到影响。
K+参与心肌细胞的复极化和自律细胞的4期自动去极化过程,其改变不仅取决于细胞内外K+浓度梯度,还与细胞膜对K+通透性有关,因此其影响是多方面的。
Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用,称膜屏障作用,对静息电位无影响。[Ca2+]o ↑,可使心肌细胞的兴奋性降低,传导减慢,收缩力增强。
在体心脏受交感神经和迷走神经的双重支配
交感神经末梢释放去甲肾上腺素,与心肌细胞β受体结合,使心肌收缩力加强,传导速度加快,心率加快;阻断剂心得安
迷走神经末梢释放乙酰胆碱,与心肌细胞M受体结合,使心肌收缩力减弱,心肌传导速度减慢,心率减慢;阻断剂阿托品
【动物、器材与试剂】
蟾蜍或蛙、纱布、毁髓针、眼科镊、手术剪、眼科剪、蛙板、蛙钉、玻璃分针、滴管、细棉线、蛙心夹、铁支架、万能滑轮、小烧杯、斯氏蛙心套管、双凹夹、套管夹、张力换能器、生物信号计算机采集系统
任氏液、% NaCl 、2% CaCl2 、1% KCl 、1/10000肾上腺素、1/10000乙酰胆碱、阿托品、300U/ml肝素。
【方法与步骤】
1、仪器准备
2、离体蛙心的制备
3、连接实验装置
4、实验观察
1、仪器准备
打开计算机生物信号采集系统,选择实验项目-循环实验-离体蛙心灌流。
熟悉实验标记的使用。
参考:生理模拟实验软件-离子和药物对离体蛙心的影响
2、离体蛙心的制备(斯氏蛙心插管法)
在左主动脉下方穿线,靠上端结扎,作插管时牵引用
在主动脉干下方穿线,在动脉圆锥上方打一活结备用(用以结扎和固定插管)。
取蛙或蟾蜍,双毁髓后背位置于蛙板上,暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管。
左手提起左主动脉上方的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉管壁剪一斜口(注意要剪破血管内膜,每次心缩时有血自切口涌出,但不要把血管剪断,剪口位置视套管尖端长度与心脏大小而定)。
选择大小适宜的斯氏蛙心套管,盛入少量任氏液(内加一滴肝素溶液,套管内2-3cm高度) 。
左手用眼科镊提起切口缘,右手将注有任氏液的斯氏套管插入动脉干内,然后左手持左侧血管分支上的结扎线向外拉,右手将蛙心套管送入动脉圆锥。