细胞生物学实验报告-鸡红细胞的融合.ppt

鸡红细胞的融合
实验报告
实验原理
主要内容
实验目的
实验用品
需要注意的问题
1
2
3
4
实验步骤
5
6
7
数据记录及处理
结果分析及讨论
绘图
2
一、实验目的
(1)了解PEG诱导细胞融合的基本原理
(2)通过细胞融合实验,初步掌握细胞融合技术
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二、实验用品
(1)器材:生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、滴管、离心管、试管架、盖玻片、载玻片、烧杯、吸水纸
(2)试剂:%生理盐水、50%PEG、GKN溶液、Alsever溶液
(3)实验材料:鸡红细胞
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三、实验原理
同种或异种细胞在一定介质(如病毒、化学因子或电场)的诱导下,可发生细胞间的的融合,形成较大的双核或多核细胞。聚乙二醇(PEG)可与水分子借氢键结合,在高浓度(50%)的PEG的溶液中,自由水消失,导致细胞脱水而发生质膜结构的变化,引起细胞融合,PEG融合技术的关键是要选择合适的相对分子质量(1000~6000)、浓度(30%~50%)以及作用时间。
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四、实验步骤
(1)鸡血与Alsever溶液按1:4混匀,4℃冰箱中保存
(2)取1ml细胞悬液,加Alsever溶液稀释20~25倍
(3)取上稀释悬液1ml,%生理盐水混匀
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(4)1000rpm离心上述溶液5min,去上清液,重复操作3次
(5)第三次离心去上清液后,加GKN %悬液,放在37℃水浴箱预热2~3min
(6)%的PEG溶液,边加边摇匀,37℃恒温静置15min
(7)取上述液一滴,盖上盖玻片,镜检
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五、数据记录及处理
观察四个视野中的细胞,记录鸡血细胞融合情况如下表所示
视野细胞核总数
视野内融合细胞核数
2核细胞
3核细胞
所有细胞核总数
所有融合细胞核总数
1
30
4
2
0
105
12
2
26
3
0
1
3
28
2
1
0
4
31
3
0
1
8
2、数据处理:由上表原始数据得视野内发生融合的细胞核数为12个,视野内所有细胞核总数为105个,由公式:
融合率=视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细胞核数× 100%
=12/105 ×100%
=%
3、实验结果:%
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七、结果分析及讨论
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