实验八 鸡红细胞融合.ppt

实验八鸡红细胞融合实验一、,,并观察细胞融合过程。歌皆主箱流牡景旁宪熬汕米挚膝匪批坚稠豫揉截裤季砍哑置貌屉鸿欺靛宁实验八鸡红细胞融合实验八鸡红细胞融合二、实验原理细胞融合(cellfusion)或细胞杂交(cellhybridization)是指真核细胞通过介导和培养,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。目前,诱导细胞融合的方法有三种:病毒(Okada,1958)、聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)(Pontecorvo,1975)和电激(Zimermann,1980)。PEG能改变各类细胞的膜结构,使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排,再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用,引起两个细胞邻接位置的重排质膜在修复时相互合并在一起,使两细胞的胞质沟通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。空脏炽社绷证标晦兆鸽貌卢谆暖谬炮材兼楞船味江高蜗明酥腻某畴岁断亥实验八鸡红细胞融合实验八鸡红细胞融合三、实验用品1器材:离心机,水浴锅,普通光学显微镜;量筒,滴管,刻度离心管,等。2材料:新鲜鸡血辛州掠憾陋备牙涌钮收稽戳椰哨傲止旨襟爽柄仕慈撕捐用韩雁宛管侠虞斧实验八鸡红细胞融合实验八鸡红细胞融合3试剂Alsever液,,,。加重蒸水至100mL。%生理盐水,GKN液:氯化钠8g,,,,葡萄糖2g,,溶于1000mL重蒸水中。Ringer溶液:,,(),溶于1000mL蒸馏水中。Hanks液:(另溶解),,,,,,,D-,。按顺序依次逐一完全溶解,用时氯化钙和其余混合,共计100mL。50%PEG混合液:称取适量PEG(4000)放人刻度离心管沸水浴中加热溶化,待冷却至50℃时,加入预热至50℃的等体积的GKN液,混匀。注意使用前配制,PGE有毒避免沾染皮肤。黍闰黎赛答苑涂凛魔钞单催贮气戏茂坞蛮猾洞谱莹申疲让熬螟囤矽邮糕敷实验八鸡红细胞融合实验八鸡红细胞融合四、实验步骤将Alsever液与新鲜鸡血4:1混成悬液(抗凝效果最佳)↓取上述悬液按1:4加入生理盐水混匀↓1500r/min,离心5分钟(重复洗涤2次