RIPA裂解液说明书C1053.doc

RIPA裂解缓冲液(RIPA Lysis Buffer,#C1053)
描述:RIPA 裂解缓冲液,提供完整的细胞蛋白制备方案。
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用,是经典和最常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA Buffer制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作,适用于大部分抗原表位的检测,特别适用于免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用。我们提供的RIPA Buffer的成分为:50 mM Tris-HCl (pH ), 150 mM NaCl, 1% NP-40, % SDS,适于western blot和绝大多数蛋白-蛋白相互作用的免疫共沉淀。
组成: 100 ml RIPA Buffer:50 mM Tris-HCl (pH ), 150 mM NaCl, 1% NP-40, % SDS.
储存:4 oC。
制备细胞裂解产物
800g 4℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV);
每50~100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液(250~500 ml),冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;
12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;
假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g 4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。
制备组织裂解产物
取50-100 mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS