常用分子生物学技术的原理及应用
The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application
目录
第一节分子杂交与印迹技术
第二节 PCR技术的原理与应用
第三节核酸序列分析
第四节基因文库
第五节生物芯片技术
第六节生物大分子相互作用研究技术
第七节遗传修饰动物模型的建立及应用(了解)
第八节疾病相关基因的克隆与鉴定(了解)
第一节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization & Blotting Technology
变性
复性
具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下,按碱基互补原则形成双链,称为核酸分子杂交。
一、核酸分子杂交概念
DNA-DNA
杂交双链分子
(一)、DNA的变性
在某些理化因素作用下,DNA双链解开成两条单链的过程。本质是双链间氢键的断裂。
变性的方法
(1)热变性:温度升高到90―100℃时,双链核酸分子链间的氢键完全断裂。
(2)酸碱变性:pH值低于3或高于10时,双链核酸分子链间的氢键断裂。
(3)化学试剂变性:如尿素、甲酰胺、甲醛等使双链核酸分子链间的氢键断裂。
(二)、DNA的复性
DNA-DNA
杂交双链分子
变性
复性
不同来源的DNA分子
(二)、DNA的复性
DNA复性的定义
在适当条件下,变性DNA的两条互补链可
恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性。
退火(annealing)
热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性,
这一过程称为退火。
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