简析砷对胰岛素依赖性葡萄糖转运的影响.pdf

石河子大学
硕士学位论文
砷对胰岛素依赖性葡萄糖转运的影响
姓名:张冰荫
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:慕晓玲
20100601
摘要
目的:不同浓度砷(NaAsO2)对胰岛素依赖性葡萄糖转运的影响,并进一步探讨其可能的作用机
制。
方法:(1) 诱导 3T3-L1 前脂肪细胞分化;油红 O 染色鉴定成熟脂肪细胞;提取油红 O 染液,在
分光光度计 490nm 波长处检测吸光度(A)定量分析砷对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响;(2)MTT
检测砷对 3T3-L1 前脂肪细胞和成熟脂肪细胞增殖能力和活力的影响;(3)葡萄糖氧化酶法检测砷
对 3T3-L1 脂肪细胞葡萄糖消耗量的影响;(4)免疫荧光细胞化学法检测砷对 3T3-L1 脂肪细胞葡萄
糖转运蛋白 4(GLUT4)的移位的影响;(5)Western-blot 检测砷对 3T3-L1 脂肪细胞 GLUT4 和 NF-
kBp65 的表达的影响;(6)Elisa 检测砷对 3T3-L1 脂肪细胞因子 IL-6,IL-8 和 TNF-a 的表达含量的
影响。
结果: (1) 3T3-L1前脂肪细胞呈成纤维样贴壁生长,诱导分化为成熟的脂肪细胞后用油红O染色,
结果显示有红色脂滴,确定是脂肪细胞。分光光度计检测正常组和砷组吸光值,结果砷组油红O吸
光值(±)明显低于正常组(±),两者之间差异有统计学意义(p<);(2)
不同浓度As2O3对3T3-L1前脂肪和脂肪细胞生长增殖和活性的影响:结果低浓度砷(5µmol/L以下)
对3T3-L1前脂肪细胞的增殖表现为促进作用,相反,高于此浓度时抑制细胞的增殖;不同浓度砷对
3T3-L1前脂肪细胞分化均表现为抑制,和正常组相比,差异具有统计学意义(p<),并呈一定的
量效关系。(3)不同浓度砷(1、5、10、15、20µmol/L)作用于3T3-L1脂肪细胞均抑制脂肪细胞葡
萄糖消耗,±、±、±、±、±
均低于正常组(p<),葡萄糖消耗量随砷浓度的增加而减少(P<)。在1µmol/L胰岛素刺激
下,染砷组3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的消耗量与胰岛素组相比有统计学意义(P<)。(4)和正常
组相比,砷染毒组3T3-L1脂肪细胞GLUT4的转位受到阻滞,在胰岛素刺激的情况下,染砷组细胞
GLUT4在胞膜上的荧光颗粒也明显低于胰岛素组(P<)。(5)砷抑制GLUT4蛋白的表达(P<)
和促进核因子NF- kBp65的表达(p<); (6)IL-6、IL-8和TNF-a的表达随砷浓度的增加及作用
时间(24、48、72h)的延长而增加(p<),并且呈量效关系。
结论:(1)3T3-L1前脂肪细胞成功诱导分化为3T3-L1脂肪细胞;(2)在3T3-L1脂肪细胞,低浓度砷
(5µmol/L以下) 可以促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖,高浓度砷抑制其增殖;不同浓度砷对3T3-L1
前脂肪细胞的分化都产生抑制作用。(3)砷抑制脂肪细胞对葡萄糖的消耗以及GLUT4的转位和表达;
(4)砷降低胰岛素的敏感性而诱发胰岛素抵抗,其分子机制可能与核因子NF- kBp65,IL-6,IL-8和
TNF-a的高表达有关联。

关键词:3T3-L1 前脂肪细胞;分化;三氧化二砷;胰岛素抵抗;机制
论文类型:A(基础研究)
I
Abstract
Objective: To investigate the effects of Arsentic on the glucose metabolism of insulin-dependence in
3T3-L1 adipocytes and discuss the possible mechanism.
Methods: (1) The differentiation of 3T3-L1 preadipocytes was identified With rathonum red . (2) The
proliferation of 3T3-L1 preadipocytes was detected by MTT. (3) The amount of glucose consumption of
the 3T3-L1 adipocytes after incubation with Arsenic for 48h was determined by Glucose