NCBI需找目的基因(放线菌actinomycetes)
引物的设计
从NCBI网站上,利用其搜索放线菌基因有关信息。仔细阅读其相关参数何其信息,并将其DNA序列保存。打开Oligo 7软件,点击File,再点击子菜单中的open,然后找到我们之前已保存的放线菌基因,文件名为actinomycetes gene。然后打开如下:
点击Search For primers&probes(可以根据自己需求对下面条件进行选择)
然后经过软件找出如下8种结果
根据我们需求选择最适合的的那个引物,即是第5个,并双击得出其PCR的信息,并将其作为目的引物。
DNAman分析引物间序列的酶切位点
输入基因的CDS 放线菌(actinomycetes) DNA序列并选定,点击sequence的下拉菜单load sequence的子菜单from selection。点击图中的“是”就可以将序列导入
分析CDS序列的酶切位点
把CDS序列和选用质粒的酶切位点进行比较,经核对,二者没有相同的酶切位点所以用质粒的内切酶不会破坏目的基因序列的完整性
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