[硕士论文]小鼠肥大细胞瘤微小基因疫苗的研究.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
小鼠肥大细胞瘤微小基因疫苗的研究
姓名:张兴黔
申请学位级别:博士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:钱关祥
20050501
作者签名:』咝日期:导师签名:麴坪学位论文作者签名;≯鬈笏日期:趁￡。丝:’葛本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。
小鼠肥大细胞瘤微小基因疫苗的研究中文摘要乩是引起肿瘤排斥反应的主要靶点。正常组织除不表达蝴为了研究入口⑶虻鞍蚱舳釉谛∈蠓蚀笙赴鯬赴械淖发展新的抗肿瘤疫菡提供了新的途径。小鼠肥丈缨胞瘤模型来源于小鼠,使得虺晌@硐氲闹琢雒庖咧瘟瓢械悖∈蠓蚀笙赴鯬渤晌@硐氲肿瘤研究模型。细胞因子在抗肿瘤免疫中具有重要的作用。白介素】是含有鯽螺旋结构的细胞因子家族中的成员之~,分子量为—S捎贗谀些方面的功能与一饔棉芊矗纯梢种萍せ钣盏甲和笏劳痛俳莅拖胞的存活,使得—在抗肿瘤免疫过程中的作用可能优于。本研究~。全文共分为三个部分,主要内容和结果如下:⑶虻鞍谆蚱舳拥目寺〖捌湓赑赴械幕钚匝芯录活性,通过┰黾际酰颐强寺×的人微球蛋白基因启动予然后分别构建以F舳拥脑銮啃吐躺ü獾鞍谋ǜ嬖靥逡约耙F舳拥腅粜远哉赵靥濉=街种柿在电穿孔法介导下分别转染细胞,采用的方法比较瞬时转染细胞的表达。结果显示,。并且在细胞中舳拥淖B蓟钚缘陀谌通过对赴榈嫉目怪琢雒庖叻肿踊频难芯恳约爸琢鱿喙乜乖牡姆⑾郑现已发现的细胞肿瘤相关抗原是由虮嗦耄渲械木烹类分子的睾丸和胎盘外,没有虻谋泶铩S捎赑基因只在肿瘤细胞中表达,细胞反应,以及该抗原肽特异性赴从δ芊翊锏接行У目怪琢雒庖摺M保怨薆的结果显示,在/的甕作用下,尽管表达的的细胞数量没有差异,上辱苇二医斜大学博士学位语文
长趋势一致。与对照组相比,经筛选后的/∞冲和/。通过该启动子中所含干扰桑刺激反应元件,可在琢隹乖砦惶匾煨訲细胞免疫的研究残基连接在一起,形成—籰狟上述方式将拗菩员砦恍蛄蠵。。和人⑶虻鞍紫嗔纬蒔球蛋白融合分子和基因共表达载体/.蚿疌甈鐌染缨胞后得到相应的质粒转染细胞/、/和/经筛选得到的其他基因修饰细胞疌疨和/,通过有限稀释法,我们培养了/、/蚉疌赴的单克隆细胞系。各单克隆细胞的致瘤性试验表明,接种/和/一赴男∈蠖贾挥バ∈笾铝霾⑶疑せ郝4右陨辖峁梢钥闯觯琍单克隆细胞的致瘤性远低于其筛选的混合克隆细胞鳳罥タ寺细胞的致瘤性没有改变。为了探讨各基因修饰细胞致瘤性差异的原因,我们分治觯冉贤凰!罩基因启动子。以上结果表明,人蚱舳釉谛∈蠓蚀笙赴鱿赴鸓盏甲饔孟碌骺叵掠文康幕虻谋泶铩在细胞表面高水平表达特异性类分子/肽复合物是诱导Υ鸬谋匾L件。为了增强特异性薪峁乖谙赴砻娴牡莩剩颐枪菇肆礁鲭挠隑⑶虻布哿有纬傻娜诤戏肿印5谝桓鋈诤戏肿邮墙獺一。限制性表位序列弧5聂然擞肴薆⑶虻鞍椎陌被耍ü拾彼岷退堪彼嶙槌傻个氨基酸融合分子;第二个融合分子通过融合分予。然后构建上述融合分子的真核表达载体//,转染细胞后分别命名为/蚉疨<せ頣淋巴细胞需要双信号,一是通过榈嫉目乖匾煨孕藕牛硪桓鍪枪泊碳ば藕拧N颐;。别通过拗菩晕寰厶迦旧ê⒃嘞赴奈寰厶迦旧ǚ治霰砻鳎琍疌细胞免疫小鼠的赴形寰厶逖粜月首罡撸锏ァ疨和白一—上瘁摹二医斜土学博士学位论文
/蚉疌錶庖咝∈蟠碳で昂驣—置谙赴坑邢灾钜/免疫小鼠组分别是.%和.%。通过ǘ云⒃⑶译拇碳ず驪疌甈免疫小鼠甕分泌细胞数量明显多于/免疫小鼠组.=徊降拿庖弑;な匝橹な担琍免疫可以提供机体抗肿瘤保护性免疫,而/免疫无保护作用。以上结果表明,融合分子可以诱发机体产生抗原特异性赴从