实验六 胰蛋白酶活力的测定.ppt

实验六胰蛋白酶活力的测定
(先打开水浴锅,温度设置成40摄氏度)
一、实验目的
二、实验原理
三、器材仪器和主要试剂
四、实验操作
五、思考题
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一、实验目的
掌握定量测定蛋白酶的活性的方法,了解本实验的酶、底物和生成物的相关性质,以及本反应的环境条件。
进一步理解酶活力和比活力的概念
巩固比色法测定物质含量的基础,掌握721型分光光度计的原理和使用方法,学习绘制标准曲线的方法
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二、实验原理
,它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。
,是磷钨酸和磷钼酸的混合物,它在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原产生蓝色(钼蓝和钨蓝的混合物,680nm)
,从而推导出酪氨酸的量,根据生成物的含量可以计算胰蛋白酶的活力。
:在40C,,水解酪蛋白每分钟产生1 g酪氨酸为1U。
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三、器材仪器和主要试剂
721 型分光光度计
Folin 试剂甲液,乙液
% 酪蛋白
100 μ g/mL Tyr 溶液
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四、实验操作
1、酪氨酸标准曲线的制作
以酪氨酸浓度μg/ml数为横坐标, A680nm为纵坐标,作出标准曲线。
管号
1
2
3
4
5
6
样品
Tyr 100g/ml(ml)
0





水(ml)





0
稀释后Ty(μg/ml)
0
20
40
60
80
100
Na2CO3(ml)
5
5
5
5
5
5
酚试剂(ml)
1
1
1
1
1
1
迅速混合,于40℃放置15分钟
A680nm
调0
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2、蛋白酶活力的测定
管号
酶液(ml)
酪蛋白(ml)
三氯
醋酸(ml)
40℃水浴准确保温10分钟
三氯
醋酸(ml)
酪蛋白(ml)
40℃水浴保温10分钟,过滤得滤液
1号(样品)
1
2
----
3
-------
2