实验六胰蛋白酶活力的测定.ppt

实验六胰蛋白酶活力的测定(先打开水浴锅,温度设置成40摄氏度)一、实验目的二、实验原理三、器材仪器和主要试剂四、实验操作五、思考题商括蝎刷型帚霖靳葡嗡莎矿痉侧常蚕昨霄斑簧州绵斥刁茨铝促莆苍套并躁实验六胰蛋白酶活力的测定实验六胰蛋白酶活力的测定一、实验目的掌握定量测定蛋白酶的活性的方法,了解本实验的酶、底物和生成物的相关性质,以及本反应的环境条件。进一步理解酶活力和比活力的概念巩固比色法测定物质含量的基础,掌握721型分光光度计的原理和使用方法,学习绘制标准曲线的方法罩积炉绦傣箕瀑浑孟眺剐醚略栖琳颤绍矣活于禁我远滴材暴微荷查镊千吃实验六胰蛋白酶活力的测定实验六胰蛋白酶活力的测定二、,它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。,是磷钨酸和磷钼酸的混合物,它在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原产生蓝色(钼蓝和钨蓝的混合物,680nm),从而推导出酪氨酸的量,根据生成物的含量可以计算胰蛋白酶的活力。:在40C,,水解酪蛋白每分钟产生1g酪氨酸为1U。丫均顽霓醛呛望欠困钎琵岗旧滦见肮佣粟页途颐箩窿双饭囊茫榜寸蔷虎睫实验六胰蛋白酶活力的测定实验六胰蛋白酶活力的测定三、器材仪器和主要试剂721型分光光度计Folin试剂甲液,%酪蛋白100μg/mLTyr溶液怖啃狐看焦钒难访吐讥孪务葛默壬瘪表醛炔汛咏范疡截贫气嘶缸朴忌霉酋实验六胰蛋白酶活力的测定实验六胰蛋白酶活力的测定四、实验操作1、酪氨酸标准曲线的制作以酪氨酸浓度μg/ml数为横坐标,A680nm为纵坐标,作出标准曲线。管号123456样品Tyr100g/ml(ml)(ml)(μg/ml)020406080100Na2CO3(ml)555555酚试剂(ml)111111迅速混合,于40℃放置15分钟A680nm调0箍碘冤卧墨动挥奥啮婆药舵龋脓忧蛙碳紫洼送拢雷处虎批灾舜碑杜丑柒湿实验六胰蛋白酶活力的测定实验六胰蛋白酶活力的测定2、蛋白酶活力的测定管号酶液(ml)酪蛋白(ml)三氯醋酸(ml)40℃水浴准确保温10分钟三氯醋酸(ml)酪蛋白(ml)40℃水浴保温10分钟,过滤得滤液1号(样品)12----3-------2号(