实验六 胰蛋白酶活力的测定.ppt

实验六胰蛋白酶活力的测定?(先打开水浴锅,温度设置成 40 摄氏度) ?一、实验目的?二、实验原理?三、器材仪器和主要试剂?四、实验操作?五、思考题一、实验目的?掌握定量测定蛋白酶的活性的方法,了解本实验的酶、底物和生成物的相关性质,以及本反应的环境条件。?进一步理解酶活力和比活力的概念?巩固比色法测定物质含量的基础,掌握 721 型分光光度计的原理和使用方法,学习绘制标准曲线的方法二、实验原理?,它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。? Folin 试剂,是磷钨酸和磷钼酸的混合物, 它在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原产生蓝色(钼蓝和钨蓝的混合物, 680nm ) ?,从而推导出酪氨酸的量,根据生成物的含量可以计算胰蛋白酶的活力。? :在 40 ?C, 的条件下,水解酪蛋白每分钟产生 1 ?g酪氨酸为 1U 。三、器材仪器和主要试剂? 721 型分光光度计? Folin 试剂甲液,乙液? % 酪蛋白? 100 μ g/mL Tyr 溶液四、实验操作?1、酪氨酸标准曲线的制作以酪氨酸浓度μg /ml 数为横坐标, A 680nm 为纵坐标,作出标准曲线。迅速混合,于 40℃放置 15分钟 111111 酚试剂(ml) 5 100 0 65 80 5 调0 A680nm 5555 Na 2 CO 3 (ml) 60 40 20 0 稀释后 Ty (μg /ml ) 水( ml) 0 Tyr 100 ? g/ ml (ml) 样品 4321 管号2、蛋白酶活力的测定 2 ------ 3 ---- 12号(对照) ------- 3 ---- 211号(样品) 40℃水浴保温10分钟, 过滤得滤液酪蛋白( ml ) 三氯醋酸( ml ) 40℃水浴准确保