脯氨酸测量.doc

植物体内游离脯氨酸含量的测定二、原理磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应,当用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三酮加热处理后,茚三酮与脯氨酸反应,生成稳定的红色化合物,再用甲苯处理,则色素全部转移至甲苯中,色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度,即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。三、材料、:植物叶片。:﹪酸性茚三酮溶液配制:·L-1磷酸中,搅拌加热(70℃)溶解,贮于冰箱中。3%磺基水杨酸配制:3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。10μg·ml-1脯氨酸标准母液配制:精确称取20mg脯氨酸,倒入小烧杯内,用少量蒸馏水溶解,再倒入200ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度(为100μg·ml-1脯氨酸母液),再吸取该溶液10ml,加蒸馏水稀释定容至100ml,即为10μg·ml-1脯氨酸标准液。冰醋酸;甲苯。四、实验步骤1.     ,编号,按下表配制每管含量为0~12μg的脯氨酸标准液。加入表中试剂后,置于沸水浴中加热30min。取出冷却,各试管再加入4ml甲苯,振荡30秒钟,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液试剂管号01234510μg·ml-1脯氨酸标准液(ml)蒸馏水(ml)冰醋酸(ml)﹪酸性茚三酮(ml)(μg),以甲苯溶液为空白对照,在520mm波长处测定吸光度(A)值。~5号管脯氨酸含量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。,液氮处理保存,材料放入研钵中并加入5ml3%的磺基水杨酸溶液研磨匀浆,然后转入10mL离心管中,在沸水浴中提取10min(提取过程中要经常摇动),冷却后于3000rpm离心10min,上清转入5mL离心管中,上清即为脯氨