上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除●文中已经明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:蔫步日期:20}1年3月2_日■ 上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密0 ,在 年解密后适用本版权书。本学位论文属于● 不保密矿学位论文作者签名:蘸矽 指导教师签名:f却蹄日期:2-l1年3月2日 Et期:2纠1年弓月工日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单●姓名工作单位职称 备注杨宪时 东海水产研究所研究员主席陈舜胜 上海海洋大学教授 委员周培根 上海海洋大学教授委员汪之和 上海海洋大学教授委员曲映红 上海海洋大学讲师 秘书答辩地点食品学院A209 答辩日期 2011-01-20●上海海洋大学硕士学位论文几种淡水鱼轻酶解肌球蛋白重链基因的cDNA克隆及结构解析摘要●肌球蛋白约占鱼骨骼肌肌原纤维蛋白质的50%以上,能和肌动蛋白结合形成细胞运动如胞质分裂和肌肉收缩等所需的物质,有“分子马达”之美誉。肌球蛋白分子由两条重链亚基和四条轻链亚基组成。分为两个功能区域:,具有ATPs.∞活性和与肌动蛋白结合的能力;,(1ightmeromyosin,LMM),具有在生理性离子强度下形成粗丝的能力,并与鱼肌肉蛋白质的凝胶形成能力有关。鲢鱼(Hypophthalmichthysmolitrix)、鳊鱼(Parabramispekinensis)、鲫鱼(Carassiusauratus)和鳙鱼(Grammonoidesopisthodom)是淡水鱼中最为常见的鲤科鱼类,因一具有低值、高产的特点,一直以来是加工利用的主要对象。迄今为止,国内关于淡水鱼类肌肉蛋白质分子生物学方面的研究报道很少。据此,本文选择上述四种淡水鱼为研究对象,在分子基因水平上对它们骨骼肌轻酶解肌球蛋白展开了一定的研究。早期的研究中,我们已经通过Y-RACE从冬季和夏季鲢鱼的骨骼肌中分离到两种肌球蛋白重链同工型基因,分别命名为低温型()和高温型(),但它们仅包含了3’端约550bp的核苷酸序列;另外,利用3,端的序列信息,。本文以两种同工型基因全长eDNA为模板,通过对两种同工型基因5,.端的延伸,获得了编码鲢鱼轻酶解肌球蛋白(LMM)的全长cDNA序列及推断的氨基酸序列。另一方面,采用RT-PCR和3'-RACE法对鳊、鲫、鳙鱼3,端的部分轻酶解肌球蛋白重链eDNA基因进行了克隆和测序,这些基因包括了部分3,.翻译区和全部3’.非翻译区。通过生物信息学软件对上述获得的轻酶解肌球蛋白的结构进行了深入的解析,并通过分子系统树进一步对LMM的基因和功能歧化进行了分析。◆研究结果表明:SC-%的同源性;(Ctenopharyngodonidella)低温型(gel0)%的高同源性;(geI)和高温型(ge30)%%的同源性。另一方面,将来自冬季的鳊、鲫、鳙鱼与其它鱼类部分LMM重链同工型的氨基酸序列进行比较,、草鱼gel0和鲤上海海洋大学硕士学位论文鱼(Cyprinuscarpio)e10之间显示高的同源性(%.%)。在对全长LMM结构解析中,发现低温型的$C-W和gel0与其它LMM相比,在初级结构上展现的特有变异主要发生在21个氨基酸残基位点,其中9个属保守性残基。鲢鱼两种LMM的初级结构的氨基酸序列均显示了一个高度保守的、,即7个残基的重复排列(a、b、c、d、e、f、g)n,且a、d位点主要由疏水性残基占据,(%)略高于se-w(%),■似乎表明前者相对于后者具有更为稳定的(;双螺旋结构表面的b、c、e、f、g位点充满了带电残基,与粗丝结构的形成有关。鳊、鲫、鳙鱼的部分轻酶解肌球蛋白重链的氨基酸序列均显示了亲水性模式,但鳊鱼和鳙鱼相对于
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