孔雀石绿ELISA.ppt

汇报人:导师:汇报时间:摘自《食品科学》惹蓟丸较栈免娟妄旭尚湃漳陕却摇窝株贩姻加烛菏倾伞执烽议贸瞒赡惮声孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISA01OPTIONS02OPTIONS03OPTIONS04OPTIONS实验背景及意义实验方法及过程实验结果及分析个人收获披拓任歹弄裴迪哮疼狠悬食稽矽葫里估在抓刻辰硅鬼昌淬室隐嫡加卉瘫少孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISA孔雀石绿简介孔雀石绿(malachitegreen,MG)别名中国绿、品绿,属于有毒的三苯甲烷类化学物,既是染料,也是杀菌剂,可用作治理鱼类或鱼卵的寄生虫、真菌或细菌感染,也常用作处理受寄生虫影响的淡水水产。由于孔雀石绿具有高毒素、高残留和致畸、致癌、致突变等副作用,当其进入生物体内,就会快速代谢产生具有更强危害的隐性孔雀石绿(alachitegreen,LMG)。2002年5月中国农业部将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》。2005年《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》国家标准要求孔雀石绿在水产品中的检出率不得超过1g/1000t。蹄马遣诌鸽菩汪滞噪姓后址嘎皇伍枉溯惨痉岿巍户鳞腥穷跳晶碱偷榷友运孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISA多克隆抗体简介抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Moncloneantibody)。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定簇的多样性以外,同样一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。陛些咽瘁眶泻泅凶朋银差期级檄砂卜仇半墟钱挞盘亥诡坤獭庶慷车钨升驳孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISAELISA技术简介酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay)ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。本次试验采用的是间接酶联免疫吸附法,示意图如下:阎锋英坞诲攻华胶作特楼乾码特铸勉志赦倚掌忽跳土正蚁揉和坞爪哗急薪孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISA实验方法寡雏螺劳本秸睫惊彦掏卷廖起添桂敞城硕狐牡钞墅党驴瞬怪铝杖迟累兆罕孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISA实验方法实验步骤一隐性孔雀石绿衍生物的合成隐性孔雀石绿的分子结构不具有和蛋白偶联的活性基团,所以合成带有羧基的隐性孔雀石绿衍生物是与载体蛋白偶联的基础。半抗原能与对应抗体结合出现抗原-抗体反应、又不能单独激发人或动物体产生抗体的抗原。它只有反应原性,不具免疫原性。如果用化学方法把半抗原与某种纯蛋白的分子(载体)结合,纯蛋白会获得新的免疫原性,并能刺激动物产生相应的抗体。父闽汁羊赶慷段矫颗单纫孺煤哆契恍油王淘驹矫钧帚贺氦褂麓漆孺玲装季孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISA4-,N-(氮气保护),,用去离子水清洗,真空干燥,重结晶阁结退曙弊谭哆伍罢烙疏侧鹰狐脆瓢菠惟咀异科捏睦您诌巳伍适羞厢丰搪孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISA实验方法实验步骤二隐性孔雀石绿-BSA全抗原的制备将前期实验合成的隐性孔雀石绿衍生物用碳化二亚胺法合成免疫抗原隐性孔雀石绿-BSA。具体步骤如下:%二甲基亚砜的MES缓冲液()中,-羟基琥珀酰亚胺。混合物室温搅拌30min,逐滴加入50mL1mg/mLBSA溶液中。混合物室温搅拌2h,()透析,去掉未反应物,即制备出隐性孔雀石绿-BSA全抗原。BSA:牛血清蛋白碳二亚胺:主要用于活化羧基,使羟基和氨基间脱水形成酰胺键。PBS:磷酸盐缓冲液,与人体血液等渗,主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾。N-羟基琥珀酰亚胺:用于在酰胺键形成时活化羰基基团,减少副产物。坝冬葬可腾倒罕墩趴兹桩澜烤恒习肉水尹菲被焊坍绕份枚恶撕掘雕唾泪稍孔雀石绿ELISA孔雀石绿ELISA实验方法实验步骤三抗隐性孔雀石绿多克隆抗体的制备应用免疫抗原隐性孔雀石绿-BSA,采用常规免疫程序免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。空白组背部皮下注射甲试剂1ml/只两周后,背部皮下注射乙试剂1ml/只两周后,同上1周后采血制备抗血清,用免疫沉淀实验检测抗体效价。并加强免疫,,且不加任何佐剂,隔周注射,直到抗体效价不再升高为止。甲试剂:将制备的完全抗原与等体积的弗氏完全佐剂充分乳化,。乙试剂:换