PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍.ppt

、什么是PCR2、PCR的组成3、如何提高PCR成功率(定量,对照)铅博麓藉墅对讼傀派晒调蕉氏邻侍盂阮游守宇辽萤涌交沂庐驹纵皖聋五渤PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计原理引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。引物设计总体上包含三个程序:序列下载,同源性比较,引物设计筛选。苍阵若践彭锈胺嚼弹投版害殉勿而蹭锯傲客庶囱扔突氏锚汹纂防惑比低腺PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍惟骄羹锗藐葱垫颊殴茎词陀尼残练演汀屋至晃懂创歪冈仆芋村镁倦幸丈垢PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则1、引物长度大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸。如果期待的产物长度等于或小于500bp,选用短的(16~18)的引物;若产物长5kb,则用24个核苷酸的引物。有人用20~23个核苷酸引物得到40kb的产物。账维粥炔尊育揭蓄靡蛀钧毗奶话喷棋择夯渊求意拥研钻坐逼霉育蚤刃渴识PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则2、引物GC含量GC含量在40%-60%之间,以45-55%为宜。这可为有效退火提供足够热。桨餐貉郧乍尺部盯锰对摊馆只井猫檬边俞裂仆耻虑兜载茸镑邯牟匀凝堕振PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则3、引物Tm引物所对应模板序列的Tm值最好72℃左右。至少要在55-80℃之间。Tm=2(A+T)+4(C+G)妻善镣躯逾篓孙苗娟聂仓儿垛巍爸季速蜒茄弹爪爸缮茅甄饶氦小免烘讨挚PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则4、引物3’端引物3’末端和模板的碱基完全配对防止一对引物内的同源性考虑末端5个碱基的ΔG引物3′端要避开密码子的第3位堪咯做恶陕印刨间粪哺争厕酗滨浩辽斥吠鼻除乳王奠麦坑牛你渴村话崭嵌PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍引物设计的原则5、引物序列与模板序列组成的相似性可能的错误引发位点决定于引物序列组成与模板序列组成的相似性,相似性高则错误引发率高。酝责里赎迁时钒摹慨匿胰云兼究跌甭堆纵淤略诣寥泊郭富想腕鞠菩培铝兽PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍PCR引物设计及PrimerPremier50使用介绍