《核酸的酚抽提》实验报告.doc

蚈《核酸的酚抽提》实验报告蚈实验原理羄在EDTA和SDS等去污剂存在下,用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提,可以得到哺乳动物基因组DNA,用此方法得到的DNA长度为100~150kb,适用于λ噬菌体构建基因组文库和Southern印迹分析。;-Cl,;,;3mol/LNaAc,;分别进行高压灭菌。:10mg/mL,配好后用一次性过滤器过滤,-20℃保存。:100mmol/LNaCl,10mmol/LTris-Cl(),25mmol/LEDTA()。:200mmol/LNaCl,20mmol/LTris-Cl(),50mmol/LEDTA(),200μg/mL蛋白酶K,1%SDS。:将胰RNA酶溶于10mmol/LTris-Cl()、15mmol/LNaCl溶液中,浓度10mg/mL,于100℃水浴处理15min以破坏DNA酶,缓慢冷却到室温,-20℃保存。:10mmol/LTris-Cl(),1mmol/LEDTA()。()∶氯仿∶异戊醇=25∶24∶1(体积比)。∶异戊醇=24∶1(体积比)。,,在冰浴中用玻璃匀浆器匀浆至无明显组织块存在,但勿将细胞破碎。,5000r/m离心30~60s,弃上清。,分两管,,缓慢翻转混匀,55℃水浴处理12~18h。,37℃水浴1h。,冰浴冷却,10000r/m离心10min。含DNA的水相一般在上层,中间为蛋白质沉淀,下层为有机相,但DNA浓度过高时,含DNA的水相会在下层,要注意观察判断。,加等体积氯仿/异戊醇,冰浴预冷,10000r/m离心10min,若界面或水相中蛋白含量多,可重复4,5操作。,加1/10体积的NaAc,小心充分混匀,,-20℃过液。,弃上清,75%冷乙醇洗涤一次,12000r/m离心15min,室温干燥(不要太干,否则DNA不易溶解),加入适量TE缓冲液,存放于4℃,轻摇溶解过夜,即可得实验用动物基因组DNA。肀膇螄蒂注意事项蝿1、记住离心管编号。膇2、在离心管平衡后,对称放入离心机,切忌将没加管套的离心管放入离心机,离心完后取出离心管。膅避免液体洒在离心机上面或钻头上。羀启动离心机后,离心机如有不正常反应或噪音,应立即停止离心,并分析原因。薈各操作步骤要轻柔,尽量减少DNA的人为降解6、取各上清时,不应贪多,《核酸的酚抽提》实验报告衿螈薄袀薁薇姓名蚄学号芀专业肈批