电镜实验报告.ppt

实验一样品Formvar支持膜的制备
目的和要求:了解和掌握透射电镜所用样品支持膜的制备技术及其
质量标准。
实验用品:
试剂:~%Formvar氯仿溶液、%中性皂液、蒸馏水
器材:铜网(200目)、5Oml小烧怀、新载玻片、平皿、玻璃水槽、普
通镊子、铜网镊子,单面面刀、滤纸,白绸布。
实验步骤
,将已配好的Formvar溶液倒入小烧杯中,
%中性皂液的载玻缸中。
,用白绸布擦净,使之光洁,然后手持载玻片一端,
插入Formvar溶液中,再垂直匀速取出,在空气中稍晾片刻,使
其形成一层膜。用刀片在膜的四周各划一条刻痕,对膜哈气后,
将载玻片有膜一端成450角或垂直慢慢压入水中,使膜缓缓地被
剥离并漂浮在水面上,取出载玻片。将清洁的铜网排列在膜上
(膜的厚度不均匀、有皱纹、尘埃或破损处不要摆网)。然后剪取
一块比膜的面积稍大的滤纸片与有铜网的膜贴附,随着滤纸的吸
湿逐步与膜、铜网贴附好后,边提边向上翻转离开水面,放置在
有滤纸的平皿中干燥后于干燥器中保存备用。
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实验二样品包埋块的制作
目的和要求:掌握常规的植物样品前处理技术及样品包埋
块的制备技术。
实验用品
试材:植物的幼嫩叶片
试剂:3%戊二醛固定液(),1%四氧化饿固定(),
酸缓冲液(),30%、50%、70%、80%、90%、100%系列
乙醇,环氧丙烷,双蒸馏水,Ep0n812环氧树脂,MNA,DDSA,
DMP—300
器材:青霉素小瓶,载玻片,注射器,量筒,烧怀,试剂瓶,玻棒,
滴管,单面或双面刀片,普通镊子,牙签,酸度计或pH试纸,
塑料包埋模板,烘箱,冰箱,真空抽气泵。
实验步骤
:从植株上取下叶片立即放在用冰块预冷的载玻片
上,并滴上数滴冷3%戊二醛固定液,用锋利的刀片切取lmm宽,
3~4mm长的小条,然后用牙签将小条轻轻地逐一拨入盛有冷的3%
戊二醛固定液的小瓶中(小瓶置冰盘中以保持0~40C),盖紧瓶塞
后用注射器多次抽气(或将无塞小瓶置可排气的真空容器中)直至
样品沉落瓶底。
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(保持0~40C):更换新鲜的3%戊二醛固定液,固定3小
时或过夜,用吸管吸出固定液,
小时,换液3~4次。
:吸去漂洗液,在通风橱中加入1%四氧化饿固定液,
固定2小时后,吸出固定液,,
换液3~4次。
:吸去缓冲液,注入乙醇,逐级梯度脱水30%、50%、70%、80%、90%、100%(两次)各15分钟。
:按照Epon812包埋剂配方配制包埋剂,注意需充分搅
拌,混匀后注入瓶中,环氧丙烷:包埋剂=3:1震荡过夜
:把样品放入包埋模板底部正中,注入包埋剂,插入
标签。
:将塑料模板放入恒温箱中加热聚合。在370、450C 、
6O0C分别聚合12小时、12小时、24小时,取出后去掉模板,