医学免疫学实习指导.doc

目录免疫学实验的目的和要求 2实验室规则 2第一篇非特异性免疫检测 3实验一血脑屏障作用 3实验二吞噬细胞的功能试验 4实验三溶菌酶的溶菌作用 7实验四血清总补体活性测定(CH50单位测定) 9第二篇特异性体液免疫检测 11实验五凝集反应 11实验六沉淀反应 17实验七补体结合反应 25实验八中和实验(Neutrlizationtest) 29实验九免疫标记技术 33实验十免疫血清的制备及效价测定 40实验十一体外抗体形成细胞检查法(溶血空斑实验PFC) 43第三篇细胞免疫检测 46实验十二E-玫瑰花环形成实验 46实验十三淋巴细胞转化实验 48第四篇:免疫病理反应 52实验十四豚鼠速发型过敏反应 52实验十五免疫复合物型超敏反应 53实验十六豚鼠结核菌素试验 55实验十七小鼠DNFB试验 56免疫学实验的目的和要求•每次实验前必须做好预习,明确本次实验的目的、内容、操作要点和相关的理论知识。•进入实验室必须严格遵守实验室规则。•实验中听从老师指导,依照三严(严肃、严格、严密)要求进行实验,做好实验记录。•认真观察分析实验结果,写出实验报告。实验中遇到的有关问题,用科学的态度总结探讨其原因,培养分析问题和解决问题的能力。实验室规则•进入实验室必须穿好白大衣。•除实验中必须的学习用品外,不要放实验台上。•实验室内不允许吃食品、饮水,严禁吸烟。•实验中一定要保持实验室安静,不要大声喧哗,严禁打闹。•实验要按老师要求操作,如发现问题要及时报告指导老师。•爱护实验器材,如有损坏应及时报告老师,需赔偿者按规定办理。•实验完毕要清理台面,需冲洗者按要求冲洗,需收回者按要求摆放整齐收回。•离开实验室时,一定要有专人负责关好门窗、水源及照明设备。第一篇非特异性免疫检测实验一血脑屏障作用[基本原理]血脑屏障由软脑膜、脉络丛的毛细血管壁和包在壁外的神经胶质细胞形成的胶质膜构成,起着天然的屏障作用,可以阻挡病原微生物及毒性产物、异物颗粒包括染料颗粒等从血流进入脑组织和脑脊液内,从而保护中枢神经系统免受损害。[实验材料]2只小鼠。1ml无菌注射器(配4号针头)。5%台盼蓝水溶液。。眼科剪子和镊子等。[实验方法]•用1ml无菌注射器吸取5%台盼蓝水溶液经尾静脉注入两只小鼠体内,,更换注射器,。•5-10分钟后观察小鼠皮肤,尤其是眼、嘴的颜色变化。•于30-60分钟,见小鼠眼、嘴呈现蓝色,即窒息死亡,腹部向下固定。•由头到尾沿背中线剪开皮肤,暴露皮下、肌肉和内脏,观察颜色变化。•小心剖开颅骨和椎骨,暴露脑和脊髓,与皮下、肌肉及内脏比较;并比较2只小鼠有何不同。[实验结果]未经颅内注射的小鼠,眼、耳、鼻皮下及肌肉均呈现明显的蓝色,但脑、脊髓均未变色;而经颅内注射的小鼠上述部位可呈现明显的蓝色。[注意事项]•台盼蓝水溶液要经过滤后方可使用。•尾静脉注射要从远断进针;如推注容易,表明进入了血管;如引起皮下凸起或发白,说明未进入了血管;拔出针头,从稍近断进针。实验二吞噬细胞的功能试验巨噬细胞能吞噬鸡红细胞、中性粒细胞可吞噬多种细菌,如葡萄球菌等。将巨噬细胞和中性粒细胞分别与鸡红细胞、表皮葡萄球菌混合,孵育一定时间后涂片染色镜检;见巨噬细胞可吞噬鸡红细胞;中性粒细胞可吞噬葡萄球菌,可计算出吞噬异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数。在巨噬细胞中亦可见到鸡红细胞发生形态改变。具此可判断两类吞噬细胞的吞噬功能和消化功能,用以评价机体的免疫状态。[实验目的]证实吞噬细胞的吞噬作用。了解机体的非特异免疫防护作用。一、豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用測定(大吞噬):[基本原理]淀粉可以刺激豚鼠腹腔引起非感染性炎症滲出,在腹腔局部出现较多巨噬细胞,巨噬细胞则能吞噬注入腹腔的鸡红细胞等较大异物。[实验材料]•实验动物:豚鼠•鸡红细胞悬液:从鸡翼下静脉或心脏取血,按1:5比例保存于Alsever氏保养液中,放4C°冰箱可用1个月,用前将鸡红细胞用生理盐水洗3次,第3次洗涤2000r/min,5min,弃上清,压积细胞用生理盐水配制为5%鸡红细胞悬液,供大吞噬试验用。•5%淀粉肉汤溶液、姬姆萨染液、玻片、注射器等。[实验方法]•取无菌5%淀粉肉汤溶液5ml注入豚鼠腹腔,常规饲养三天;实验前1小时再次注入豚鼠腹腔无菌5%淀粉肉汤溶液5ml,然后注射5%鸡红细胞悬液5ml,轻揉其腹部,使鸡血球均匀分布。•在注射后30分钟、1小时、2小时、3小时、分别用注射器抽取豚鼠腹腔液推片。•自然干燥后,姬姆萨染色,油镜观察。[实验结果]计算100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数目及被吞噬的鸡红细胞的总数,并观察鸡红细胞的消化程度,按下列公式计算吞噬百分比和吞噬指数。吞噬百分比=×100%吞噬指数=×100%鸡红细胞被消化的程度分4级