萝多糖分离提取及其抗脂质过氧化作用..doc

萝多糖分离提取及其抗脂质过氧化作用*        【关键词】 菠萝多糖抗脂质过氧化分离提取     菠萝是较常见的热带水果品种,它营养成分丰富,含有大量多糖〔1〕。研究表明,多糖具有多方面的生物活性和功能〔2-4〕。为了解菠萝多糖的抗脂质过氧化活性,本研究通过提取和纯化菠萝多糖,对其含糖率和多糖提取率以及抑制脂质过氧化的作用进行观察。结果报告如下。 1 材料与方法  材料 (1)原料:鲜菠萝(中央民族大学承坤超市),产地广西。(2)试剂:乙醇,苯酚,葡萄糖,浓硫酸,正丁醇,30%过氧化氢,NaOH,三溴偶氮胂(TBA),蔗糖,磷酸一氢钠,磷酸二氢钠,氯化钾,冰醋酸,醋酸钠,均为国产分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。(3)实验动物:雌性昆明小鼠,体重(20±2)g(北京大学医学部动物研究中心)。(4)仪器:722型分光光度计、RE-5203A型旋转蒸发仪(上海振捷实验设备有限公司);数显恒温水浴锅HH-2型(国华电器有限公司);UV-Jasco53型紫外分光光度计、EB-280M电子天平(日本岛津制作株式会社制造);SHZ-Ⅲ型循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂)。  方法  菠萝多糖的提取与纯化 将菠萝去皮,切成小块,取500g用匀浆机捣碎,按文献〔5-8〕方法进行提取,经减压真空干燥得菠萝粗多糖;采用氯仿:异戊醇=5∶1配制的液体即Sevage液去蛋白;采用氧化脱色法,将多糖溶液脱色至浅黄色;将已去除蛋白并脱色的多糖溶液灌入透析袋中透析12h,以去除水溶性小分子及离子;使用醇沉法,向已去除小分子的多糖溶液中加入4倍的95%乙醇溶液,静置过夜,沉淀过滤,干燥后获得白色菠萝多糖产品。  含糖量测定与多糖提取率 含糖量测定采用硫酸-苯酚改良法〔7〕,分别取浓度为1g/L葡萄糖标准液10,20,40,60,80,100μl各6管,(50%,g/L),,,混匀,室温静置10min,然后放入沸水浴中15min,冷水冷却至室温,用722型分光光度计于490nm处测定A值,计算标准曲线。以同法,再用待测液替代标准液,于490nm处测得A值,用标准曲线算出多糖含量。以葡萄糖为标准品得出含糖量测定标准回归曲线方程:A=×10-5+(式中C为质量浓度),r=。  抑制脂质过氧化物(LPO)检测〔7,8〕 选择丙二醛含量为测定指标,检测脂质过氧化物浓度。断头处死小鼠,迅速取出肝脏置预冷至4℃的蔗糖磷酸缓冲液中,制成10%肝匀浆,冰柜储存备用。(PBS)配成50ml。取8支试管分别加入已配好的肝匀浆1ml,再分别加入2g/L的菠萝多糖体积为:,,,,,,;对照管不加样品。各管再加1mmol/,,,使用PBS缓冲液作为空白对照组。上述反应液于37℃温育15min后,加20%醋酸缓冲液2ml,%三溴偶氮胂(TBA)显色剂1ml,终止反应,测定脂质过氧化物丙二醛含量,用722型分光光度计在532nm处平行测定。 2 结果  菠萝多