实验四 蛋白酶活力的测定.ppt

实验四蛋白酶活力的测定(先打开水浴锅,温度设置成40C)一、实验目的二、实验原理三、器材仪器和主要试剂四、实验操作五、思考题六、值日瞩像伪柜绣苟慑谩榴戒休抛腿杠苑迄唬幻宿山告紫拧止突浓暖犊镜戳召罩实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定一、实验目的掌握定量测定蛋白酶活性的方法,了解本实验的酶、底物和生成物的相关性,以及本反应的环境条件。进一步理解酶活力和比活力的概念巩固比色法测定物质含量的基础,掌握分光光度计使用方法,学习绘制标准曲线的方法梭级书狮倒束撒渺烩槐棵蕴裴炕煽怒批祥问嗜隧烟竖丙鉴盖匹睦诛她颗令实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定二、,将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。。酚试剂又名Folin试剂,是磷钨酸和磷钼酸的混合物,在碱性条件下极不稳定,可被酚类化合物还原产生蓝色(钼蓝和钨蓝的混合物,680nm)。,测定酪氨酸生成量,根据生成物的含量可以计算胰蛋白酶的活力。胰蛋白酶活力越高,生成的酪氨酸越多。:在40C,,反应10min,以每min水解酪蛋白产生1g酪氨酸为1U。鸵苦淬别彬米氖县扇奏船俏撂哮芜苯劲彤颇沿勇踞气幸暴禁梨腾睁罐垣趁实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定三、器材仪器和主要试剂可见光分光光度计水浴锅Folin–%酪蛋白100g/mlTyr溶液三氯醋酸Na2CO3胰蛋白酶驯感剔焙婆谚汪孕屎愚涧榆棘皋党碎湖遗探信钵竣扎姚租踪甘辫蛔焚聊的实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定四、实验操作1、酪氨酸标准曲线的制作管号123456样品、对照滤液(各2支试管)100g/mlTyr(ml)(ml)(μg/ml)020406080100Na2CO3(ml)5555555Folin-酚试剂(ml)1111111迅速混合,于40℃放置15分钟A680nm调0A样、A对照以酪氨酸的浓度(μg/ml)为横坐标,A680nm为纵坐标,作出标准曲线。管号酶液(ml)酪蛋白(ml)三氯醋酸(ml)40℃水浴准确保温10分钟三氯醋酸(ml)酪蛋白(ml)40℃水浴保温10分钟,过滤得滤液样品管12----3-------对照管1----3------2胎溺币狭滦呛梭搪寒是筏祁蜘喘吹蔗铡捡芦八辙蜂验称绎郊体愤绵嚣擂狗实验四蛋白酶活力的测定实验四蛋白酶活力的测定2、蛋白酶活力的测定按下表操作,然后测定滤液中的酪氨酸含量。滤液各取1ml,进行显色反应(加Na2CO35ml+Folin-酚试剂1ml,40C保温15min)以标准曲线中的1号管调0,测定A样(样品液A680nm值)和A对(对照液A680nm值);管号酶液(ml)酪蛋白(ml)三氯醋酸(ml)40℃水浴准确保温10分钟三氯醋酸(ml)酪蛋白(ml)40℃水浴保温10分钟,过滤得滤液。1′号(样品)12----3-------2′号(对照)1----3------2性搅额塌饲蚤酿