真菌发酵生产天然脱落酸的新方法.doc

真菌发酵生产天然脱落酸的新方法专利名称真菌发酵生产天然脱落酸的新方法技术领域本发明属于用真菌发酵法生产天然活性脱落酸的发酵工程。脱落酸(AbscisicAcid,简称ABA)是目前世界上已发现的五大植物荷尔蒙之一。天然型的ABA由于对农作物的生长发育具有很强的调控活性,能促进果实类、谷类、豆类的成熟发育,能大幅度提高其产量和质量,又能大大增强其耐寒、抗旱和耐盐能力,因而具有广阔的应用前景。目前,ABA在基础领域的研究已深入到植物细胞与基因工程水平。然而,由于存在于植物体内的天然活性ABA光学构型仅为(S)-(+)-ABA,单纯的(S)-(+)-ABA的生产成本极高,售价昂贵,而人工合成的ABA,得到的是Racemid型,活性远小于天然型的ABA,因此,ABA应用于农业生产几乎是空谈。为了解决和满足ABA应用于农业生产的问题,近二十年来,国外开始利用微生物发酵法来生产天然活性脱落酸。1977年,,主要为固体发酵,但由于其产量很低,其商品价格很高(),1982年,日本的丸茂晋吾发现利用真菌BotrytisCinerea可生产天然活性ABA,并申请了专利,其后,于1987,1988,1990年,日本东丽公司和新日本化学工业公司的松本俊一等、相继用Botrytis菌株生产天然活性脱落酸,申请了六项专利,生产工艺分别为固体发酵,也育液体摇瓶发酵,同时采用了纤维素泡沫作载体的液体发酵,发酵产量已由15-20mg/-85mg/升发酵液,最高的产量已达300mg/L。但以上的专利还存在①发酵产量低;②发酵工艺尚局限于固体发酵和液体批次发酵,没有充分利用菌体连续产生脱落酸的特性。菌体在一个固定的培养环境中生长,产酸,当产物(脱落酸)达到一定浓度时,产生抑制作用,菌体不再分泌产物,造成营养物质、菌体和能源的浪费,使产量不能提高,生产效率低,成本高。仍然不能解决应用于农业生产上的问题。本发明的任务是寻找一个能大幅度提高脱落酸产量的新工艺,大幅度降低脱落酸的生产成本,使工业化规模生产成为可能。,大幅度提高菌种的发酵活性。、出料、PH控制的(起始PH控制、生长期PH控制、生产期PH控制、发酵终了期PH控制)发酵工艺。、产酸的培养基配方。、周控菌体发酵的代谢途径,大幅度提高脱落酸产量。本发明使用的菌种为BotrytisCinerea-CercospoxaRosicolaFD338()。该菌是用葡萄孢霉属菌株BotrytisCinereaT-1进行原生质体诱变后再同另一脱落酸产生菌CercosporaRosicola216进行原生质体融合及相关遗传诱变处理所获得的高产脱落酸菌株。本发明采用三级连续发酵,根据三级不同要求,选择了三种不同的培养基A、B、C。-2%-1%-1%-%麦芽汁5-20%-%(-%,-%,-1%-1%,