大学生自我同一状态与家庭功能、自我效能感的相关研究.pdf

分子生物学实验
指导
生物实验教学中心
主编:刘宝琦
2009-06-01
目录
绪论分子生物学实验安全注意事项及分子生物学实验室所需要的仪器设备……………………………………………1
实验一植物基因组DNA 的分离………………………………6
实验二 RNA 的分离……………………………………………11
实验三 DNA/RNA 的琼脂糖凝胶检测…………………………15
实验四 DNA/RNA 浓度、纯度的测定及浓度的调整…………21
实验五聚合酶链式反应(PCR)………………………………24
实验六随机扩增多态性DNA 反应(RAPD)……………… 28
实验七甜菜M14 品系AFLP 分析………………………………32
实验八生物信息学……………………………………………… 49
绪论分子生物学实验安全注意事项及分子生物学
实验室所需要的仪器设备
一、安全事项
在实验室中安全是最重要的,分子生物学实验经常与毒性强,甚至致癌的试剂接触,所以进入分子生物学实验室的人员,必须了解所有的安全措施,并将实验室的操作置于最安全的条件下。下面提到的几点须特别注意:

许多溶剂,像氯仿、异戊醇、异丁醇、正丁醇、甲醛和乙醚,应在通风橱中使用,并注意保护衣服、皮肤和呼吸道。另一些试剂有可能是致癌物或诱变剂,像溴乙锭、甲酰胺,焦碳酸二乙酯(DEPC)等,在操作中应注意防护,并注意使用后的处理。各种试剂在使用前都应认真看一下使用说明,特别是对一些试剂盒,掌握有关知识后,方可使用。

有些实验需要使用32P 或其它放射性物质,在实验中要确实保证遵守使用这类物质的所有守则;对放射性废弃物也要同样小心。

虽然现代生物技术领域的发展已经带来了巨大的社会和经济效益,生物技术所具有的巨大力量也给人类社会带来了许多意想不到的冲击,它既可以造福人类,也可能用来制造致命的生物武器,破坏整个人类社会的和平。1976 年6 月30 日,美国国家卫生研究院制订并正式公布了“重组DNA 研究准则”,规定禁止若干类型的重组DNA 进行实验外,还制订了许多具体的条文规定。这些规定主要包括对生物体的物理防护和生物防护。物理防护主要是:实验室必须有技术熟练的工作人员,具有正确的物理防护设备,如负压装置,高压灭菌及安全操作箱等等。生物防护主要包括选择非病原的生物体作外源DNA 的克隆工具,或者对微生物进行精细的遗传操作,减低其在环境中存活和繁殖的可能性。

实验室内所有设备都有潜在的危险,操作方法不正确,就会出现意外,所以实验室中的所有仪器的使用都应在老师的指导下进行,或者阅读本仪器的使用说明书后,方可使用。
二、分子生物学实验室所需要的仪器设备

在分子生物学实验中,许多溶液、玻璃器皿和微量移液器枪头都要高压灭菌,特别是在做RNA 有关实验时,更需要干热及湿热高压灭菌,以去除RNA 酶,电热干燥箱主要用于干热灭菌;而高压灭菌锅主要用于高压湿热灭菌。

几乎每个分子生物学实验都要用到离心机,一个分子生物学实验室至少需要4 台离心机,分别为一台低速(20000r/min)冷冻离心机、一台超速(20000-80000r/min)离心机、 微量离心管的微型(MINI)离心机、一台大容量、低速度的离心机用来收获大量的细菌培养液。

至少需要一台普通冰箱(4℃,-20℃),如有条件,还需要一台-80℃冰箱。许多动物、植物、微生物的样本以及试剂的贮存需要在低温或者超低温下贮存。制冰机也是很必要的,因为许多反应是在冰上进行的。

紫外/可见分光光度计主要用来检测DNA/RNA 的浓度和纯度,有条件的实验室用DNA/RNA 计算器来代替分光光度计,使用起来更方便。

分析天平和制备天平,天平的精度要达到千分之一或者万分之一。

主要用来进行RAPD 等实验的聚类分析及其他软件分析。

至少有一套可满足不同分子量大小的水平电泳槽和电泳仪,对于从事大规模测序的研究人员需要配备一套测序凝胶装置。还应有一套用于聚丙烯酰胺蛋白质凝胶的垂直电泳仪及电泳槽,根据需要,配备一套用于双向蛋白质凝胶的特制电泳仪。
(37℃)
用于培养细菌

用于培养液的培养
(最好带加热功能)
主要用于试剂的配制

用于熔化琼脂和琼脂糖
计(酸度计)
试剂配制
μL - 5000 μL 范围的微量移液器
一般都为可调移液器, μL— μL 、