抗cd58蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.doc

抗CD58蛋白单克隆抗体的制备及鉴定    英文题名PreparationandIdentificationofMonoclonalAntibodiesAgainstCD58Protein 关键词CD58蛋白;单克隆抗体;间接竞争ELISA;英文关键词CD58protein;monoclonalantibody;petitiveELISA;中文摘要CD58又名淋巴细胞功能相关抗原-3(LAF-3),在机体免疫中发挥重要作用,对动物妊娠早期子宫局部细胞因子网络的调节也存在着影响。本试验利用酶消化法结合柱层析法制备了绵羊红细胞表面活性蛋白CD58;通过小鼠免疫,细胞融合以及有限稀释法筛选阳性克隆,制备了抗CD58蛋白单克隆抗体,并进行了鉴定;建立了检测山羊血清中CD58的间接竞争抑制性ELISA方法,检测了未发情,发情和怀孕山羊血清中CD58的含量。获得以下结果:,SDS-PAGE结果表明制备了高纯度的CD58蛋白。±%。。,最佳的包被温度和时间为37℃1h后4℃过夜,%明胶封闭,辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(酶标二抗)最适稀释倍数为l∶32000,作用时间为30min。%聚乙二醇(PEG)4000融合骨髓瘤细胞和免疫脾细胞,用间接ELISA法筛选阳性孔,%,阳性克隆率45...英文摘要CD58,alsoknownaslymphocytefunction-associatedantigen-3(LAF-3),playinganimportantroleinimmunizationandhasanimpectontheregulatoryfunctioninsecretionoftheloca-,thesurfactantproteinCD58ofsheepredbloodcells(SRBC)-CD58monoclonalantibodieswerepreparedbyimmunizationofmice,cellfusionandlimiteddilutionscreeningofpositiveclones摘要4-5ABSTRACT5-6第一章CD58蛋白和单克隆抗体的研究进展11-19   -15       -12       -14                     -15   -19       -16              -19第二章CD58蛋白的制备19-26