细胞支原体污染.doc

细胞支原体污染一般情况及预防措施细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时,会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时,较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时,细胞之外观较无明显变化,但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。各国细胞库支原体污染的统计表,如下:国家  受支原体污染(%)  报告年度USA-FDA  15  1993(past30years)USA-  15-20  1992Japan-(IFO,RIKEN,JCR80~30~22  1981Germany-DSM  36  1990-1994Argentina  65  1987Israel  32  1986-1993China  95  1990造成支原体高污染率的原因为:~,无细胞壁,可透过一般过滤膜(-),、,:1.  已受污染的细胞2.  操作人员的疏失3.  已受污染的培养基、血清4.  操作环境不良、实验器具不洁等由于支原体为人体口腔中之正常菌丛,实验室之操作人员的污染亦可能为污染源,须十分注意。而万一细胞已受支原体污染时,最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃,以免污染其它洁净的细胞株。但是若是坚持要作去除支原体污染,有以下几种方法,只不过结果会与原始的细胞特性有差异。去除支原体污染::BM-cyclin(Roche),MRA(mycoplasmaremovalagent,ICN),Ciprofloxcin(Bayer),Enrofloxacin(Bayer):5-bromouracil,Hoechst33258,-sera预防与控制方面可从以下各点加强注意:G设备方面:1.  使用已作支原体测试ok之细胞株2.  于另一隔离之区域操作未知是否有支原体污染之细胞3.  使用不添加抗生素的培养基培养细胞G检测方面:定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O有否被支原体污染。G实验操作人员之无菌观念与无菌操作技术之要求有关支原体污染之问题与回答:o应如何避免细胞污染?细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和支原体。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。o如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?直接灭菌后丢弃之。o支原体(mycoplasma)污染的细胞,是否能以肉眼观察出异状?不能。除极有经验之专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株,无法以其外观分辨之。o支原体污染会对细胞培养有何影响?支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数,代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。o侦测出细胞株有支原体污染时,该如何处理?直接灭菌后丢弃,以避免污染其它细胞株。支原体之检测: