ms培养基配方.doc

实验八MS培养基的配制和灭菌一、 实验冃的:了解培养基的配制原理和方法,掌握其配制过程和分装方法。二、 实验材料:天平、牛角匙、量筒、烧杯、搅拌机、胶桶、组培瓶、6种母液、白沙糖、活性炭、卡拉胶。三、 方法步骤1、 母液配制大量元素(母液I)mg/L100mL(2)微量元素(母液II)(3)铁盐(母液111)(4)有机成分(母液IV)IVA和IVB(5)植物生长调节物质(2,4-D,NAA)以上各种营养成分的用量,除了母液I为10倍浓缩液外,其余的均为100倍浓缩液。其屮,母液I、母液II及母液IV的配制方法是:每种母液屮的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸倔水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1L。母液III的配制方法是:将称好的FeSO4・7H2O和Na2-EDTA-2H2O分别放到450mL蒸倔水小,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,,最后定容到1L,保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室屮。MS培养基屮还需要加入2,4■二氯苯氧乙酸(2,4・D)、蔡乙酸(NAA)、6节基嗥吟(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液()o其配制方法是:分别称取这3种物质各10mg,将2,4・D和NAA用少量(1mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1mL),溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100mL,。2、 培养基配制配制培养液用量筒从各种母液屮分别取出所需的用量:母液1为100ml,母液11、山、IVA和IVB各lOmlo再取2,4-,与各种母液一起放入烧杯中。称取54g卡拉胶;300g蔗糖;活性炭lg。在胶桶屮加入规定量的各种母液,包括生长调节物质。加水定容至1升,开搅拌机,搅匀混合液。定容至10升,搅匀。(5) 向母液混合物加入白沙糖,继续搅拌;然后停一•下搅拌机再加卡拉胶,开搅拌机混匀;接着再停搅拌机加活性炭,开搅拌机搅匀。(6) 调pH用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的N“OH溶液,逐滴滴入溶化的培养基屮,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸(〜)测培养基的pH,—()(7) 将培养基分装到所选用的培养容器中,约30ml/瓶。(8) 盖住瓶口(9) 灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕,盖上锅盖。在98kPa、°C下,,让其小的培养基自然冷却凝固。最好放置Id后再使用。四、分析MS母液分得更加细,一般实验室只分大量兀素、微量元素、铁盐、有机成分四