MS培养基配方.doc

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实验八 MS培养基的配制和灭菌
一、实验目的：
了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
 
二、实验材料：
天平、牛角匙、量筒、烧杯、搅拌机、胶桶、组培瓶、6种母液、白沙糖、活性炭、卡拉胶。
 
三、方法步骤
1、母液配制
大量元素(母液Ⅰ) mg／L 100ml。 (2) 微量元素(母液Ⅱ)  (3) 铁盐(母液Ⅲ)  (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(2，4-D，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为10倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。
其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液( mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL) mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0
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.1 mg/mL的母液。
2、培养基配制
（1）配制培养液用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为100 ml，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各10ml。再取2，4-D 10ml、NAA 2ml，与各种母液一起放入烧杯中。
（2）称取54g卡拉胶；300g蔗糖；活性炭1g。
（3）在胶桶中加入规定量的各种母液，包括生长调节物质。
（4）加水定容至1升，开搅拌机，搅匀混合液。定容至10升，搅匀。
（5）向母液混合物加入白沙糖，继续搅拌；然后停一下搅拌机再加卡拉胶，开搅拌机混匀；接着再停搅拌机加活性炭，开搅拌机搅匀。
（6）调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(～)测培养基的pH，一直