细胞培养实验写报告内容.doc

细胞培养实验写报告内容.doc细胞培养实验写报告内容1目的2原理3材料与方法(操作步骤)4实验结果5结论或结果分析实验一鸡胚原代成纤维细胞的制备与培养实验二滤泡性口炎病毒(VSV)的增殖(纯培养)实验三Hep-2细胞的传代培养实验四VSVTCIDso滴定实验五干扰素活性(效价)的测定实验六VSV中和试验(稀释血清固定病毒法)实验二鸡胚原代成纤维细胞的制备与培养一、 目的1、 掌握鸡胚原代成纤维细胞的制备及培养的基本步骤;2、 掌握活细胞的显微镜下观察;3熟悉病毒在细胞内增殖的基本判断方法。二、 原理离体动物组织通过温和的手段(机械和酶消化)形成单个细胞后,在适宜的外界环境屮,包括温度、酸碱度和气相环境,并给予充足合适的营养条件,能牛存、牛长形成单层细胞,这种原代培养的细胞具有原来体内所具备的基本特性,比如肌肉细胞的收缩功能;上皮细胞的分泌功能等。通常把这种从体内取出组织细胞开始培养到第一次进行传代Z前的这一段时期称为原(初)代培养。原代细胞最接近体内细胞的特性,因血对外界环境的变化也最敏感,因此比较适合病毒的增殖,药物的作用机制等的研究。三、 材料(按2人/组的量发放)名 称数量备 注9〜11口龄鸡胚1只无菌器械1套无菌无毒平皿2只5或10ml吸管4支1或5ml吸管1支青霉素瓶(带塞)2只Hanks'%NaHCOs3ml碘酒和酒精棉球若干细胞培养瓶2只1、 在DMEM和Hank's液屮分别无菌操作以1%的量加入双抗,吸出10〜15mlHank?s液至无菌平皿屮备用;2、 碘酒和酒精棉球分别拭擦鸡胚气室外卵壳;3、 取出两只无菌平皿,并标记①和②,待用。4、 大蹑子轻敲卵壳顶部然后小心去掉气室外卵壳;5、 消毒锡子后小心撕破卵膜,两人互相配合取出鸡胚置于盛有Hank's液的平皿①屮,小心去头、内脏、爪和粘液及血球,洗涤后置于盛有HankM液的平皿②屮,再充分洗涤;6、 取出洗净的组织块置于大青霉素瓶小,〜1mm'的小块(约250次),;用Hanks5液洗涤两次。7、 %胰蛋白酶,〜(肉眼观为肉红色)盖上瓶塞,写好标记;8、 将上述细胞瓶置于37°C水浴中,开始计时,约15〜30min,其间缓慢摇匀以充分消化。消化停止的标志是:轻轻晃动后细胞悬起,呈云雾状,很快聚集成团,表明细胞活力好。9、 消化结束后,取出,稍沉淀,缓慢吸出上清,用Hank^液小心洗涤2〜3次,可以尽量减少胰蛋白酶的残留量,然后加入DMEM液约5ml,用小头吸管充分吹打,使细胞充分分散。吸上清;重复操作3〜4次,收集细胞上清。10、 (1)上述细胞悬液自然沉降,待未消化彻底的组织块沉入瓶底后,收集上清,并加入足量的小牛血清(终浓度为10%),将细胞密度调到约IX10&个/ml。(2)经四层无菌纱布过滤后收集滤液,并加入足量的小牛血清(终浓度为10%),将细胞密度调到约IX10&个/ml;11、 将上述制备好的细胞悬液平均分配到2貝细胞瓶屮,5ml/瓶,塞好螺口塞,注意牛长面朝下,在非牛长面上做好标记,包括细胞名称,接种培养时间,组别及姓名等。12、 细胞统一•置于本室指定的CO?孵箱屮培养。13、 24h后观察细胞牛长情况,如果细胞长成单层,细胞界限清晰,大多数细胞为梭形并贴壁,布满细胞瓶的牛•长而,说明细胞牛长状态良好。实验三滤泡性口炎病毒(VSV)的增殖(纯培养)一、 实验目的掌握病毒在细胞内增殖的基本判断方法。二、 实验原理原代细胞最接近体内细胞的特性,因而对外界环境的变化也最敏感,因此比较适合病毒的增殖,药物的作用机制等研究。病毒在细胞内增殖的检测指标有细胞变化、红细胞吸附、细胞代谢改变、干扰现象、免疫荧光法检测等。由病毒引起的细胞病变称细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE),常见的细胞形态学变化为细胞变圆、聚集、融合、裂解或脱落等。三、 实验材料(按2人/组的量发放)名 称数量备 注2OOTCID5oVSV0」ml5ml和1ml吸管各1支维持液100ml含3%小牛血清的RPMI-1640液或DMEM液四、操作步骤1、上述原代成纤维细胞培养24h后,一旦细胞完全贴壁牛长良好后,则轻弃培养上清,换丄细胞维持液(含3%小牛血清的RPMI-1640),,在细胞瓶上标记换液吋间,接种病毒量。正常对照也按照上述方法换上维持液。2、 再继续培养,每间隔12〜24h观察,直至全部细胞出现明显的病变,显微镜观察细胞脱落,圆缩,则可停止培养。3、 收集全班的病毒培养物于100ml无菌盐水瓶屮,写好标记,置于一20°C冰箱充分冷冻后再置于4°C冰箱或