细胞培养实验写报告内容.doc

细胞培养实验写报告内容.doc细胞培养实验写报告内容
1目的
2原理
3材料与方法（操作步骤）
4实验结果
5结论或结果分析
实验一 鸡胚原代成纤维细胞的制备与培养
实验二 滤泡性口炎病毒（VSV）的增殖（纯培养）
实验三Hep-2细胞的传代培养
实验四VSV TCID5o滴定
实验五干扰素活性（效价）的测定
实验六VSV中和试验（稀释血清固定病毒法）
实验二鸡胚原代成纤维细胞的制备与培养
一、 目的
1、 掌握鸡胚原代成纤维细胞的制备及培养的基本步骤；
2、 掌握活细胞的显微镜下观察；
3熟悉病毒在细胞内增殖的基本判断方法。
二、 原理
离体动物组织通过温和的手段（机械和酶消化）形成单个细胞后，在适宜的 外界环境中，包括温度、酸碱度和气相环境，并给予充足合适的营养条件，能生 存、生长形成单层细胞，这种原代培养的细胞具有原来体内所具备的基本特性， 比如肌肉细胞的收缩功能；上皮细胞的分泌功能等。通常把这种从体内取出组织 细胞开始培养到第一次进行传代之前的这一段时期称为原（初）代培养。原代细胞 最接近体内细胞的特性，因而对外界环境的变化也最敏感，因此比较适合病毒的 增殖，药物的作用机制等的研究。
三、 材料（按2人/组的量发放）
名 称
数量
备 注
9~11日龄鸡胚
1只
无菌器械
1套
无菌无毒平皿
2只
5或10ml吸管
4支
1或5ml吸管
1支
青霉素瓶（带塞）
2只
Hank s9 液
250ml
1640 RMPI 或 DMEM
500ml
双抗
5ml
胰蛋白酶
1ml
小牛血清
5ml
% NaHCO3
3 ml
碘酒和酒精棉球
若干
细胞培养瓶
2只
四、操作步骤
1、 在DMEM和Hank's液中分别无菌操作以1 %的量加入双抗，吸出10~ 15mlHank，s液至无菌平皿中备用；
2、 碘酒和酒精棉球分别拭擦鸡胚气室外卵壳；
3、 取出两只无菌平皿，并标记①和②，待用。
4、 大镣子轻敲卵壳顶部然后小心去掉气室外卵壳；
5、 消毒镣子后小心撕破卵膜，两人互相配合取出鸡胚置于盛有Hank's液的 平皿①中，小心去头、内脏、爪和粘液及血球，洗涤后置于盛有Hank's液 的平皿②中，再充分洗涤；
6、 取出洗净的组织块置于大青霉素瓶中，在火焰附近用无菌眼科剪刀将其 ~lmm3的小块（约250次），；用Hanks，液 洗涤两次。
7、 %胰蛋白酶，- （肉眼观为肉 红色）盖上瓶塞，写好标记；
8、 将上述细胞瓶置于37°C水浴中，开始计时，约15〜30min,其间缓慢摇 匀以充分消化。消化停止的标志是：轻轻晃动后细胞悬起，呈云雾状，很 快聚集成团，表明细胞活力好。
9、 消化结束后，取出，稍沉淀，缓慢吸出上清，用Hank's液小心洗涤2〜 3次，可以尽量减少胰蛋白酶的残留量，然后加入DMEM液约5ml,用 小头吸管充分吹打，使细胞充分分散。吸上清；重复操作3~4次，收集
细胞上清。
10、 （1）上述细胞悬液自然沉降，待未消化彻底的组织块沉入瓶底后，收集
上清，并加入足量的小牛血清（终浓度为10%）,将细胞密度调到 约 1X106 个/ml。
（2）经四层无菌纱布过滤后收集滤液，并加入足量的小牛血清（终浓度 为10%）,将细胞密度调到约1 X106个/ml；
11、 将上述制备好的细胞悬液平均分配到2只细胞瓶中，5ml/瓶，塞好螺口 塞，注意生长面朝下，在非生长面上做好标记，包括细胞名称，接种培 养时间，组别及姓名等。
12、 细胞统一置于本室指定的CO2孵箱中培养。
13、 24h后观察细胞生长情况，如果细胞长成单层，细胞界限清晰，大多数 细胞为梭形并贴壁，布满细胞瓶的生长面，说明细胞生长状态良好。
实验三 滤泡性口炎病毒（VSV）的增殖（纯培养）
一、 实验目的
掌握病毒在细胞内增殖的基本判断方法。
二、 实验原理
原代细胞最接近体内细胞的特性，因而对外界环境的变化也最敏感，因此比 较适合病毒的增殖，药物的作用机制等研究。病毒在细胞内增殖的检测指标有 细胞变化、红细胞吸附、细胞代谢改变、干扰现象、免疫荧光法检测等。由病毒 引起的细胞病变称细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）,常见的细胞形态学变 化为细胞变圆、聚集、融合、裂解或脱落等。
三、 实验材料（按2人/组的量发放）
名 称
数量
备 注
200TCID50VSV

5ml和1ml吸管
各1支
维持液
100ml
含3 %