番茄-课件PPT（演示稿）.ppt

:一个控制番茄果实大小的:一个控制番茄果实大小的关键数量性状位点(关键数量性状位点(QTLQTL))突出和重要的数量性状与驯化有很大的关系突出和重要的数量性状与驯化有很大的关系??原始的番原始的番茄直径极茄直径极可能小于可能小于11厘米且仅厘米且仅有几克重有几克重??现代番茄现代番茄重达高达重达高达10001000克,克,直径超过直径超过1515厘米厘米原始小番茄是大可以达到足以包含数以百计的种子,但小到足以被小老鼠或鸟类取食,目的是利于种子的传播在自然种群中,大部分表型变异是连续的,是受多个基因在自然种群中,大部分表型变异是连续的,是受多个基因位点上的等位基因控制的位点上的等位基因控制的,其中有起主要作用的主效基,其中有起主要作用的主效基因因??一个番茄的数量性状位点(一个番茄的数量性状位点(QTLQTL),),,使番茄在驯,使番茄在驯化过程中迈出了一大步。化过程中迈出了一大步。??当野生番茄转化为大果品种后,从一个小果野生品种的当野生番茄转化为大果品种后,,并预言该基因有黏粒,。的功能。??引起该引起该QTLQTL效应的是一个单基因,效应的是一个单基因,ORFXORFX,其在花发育早,其在花发育早期表达,控制心皮的数目,并和人类致癌基因期表达,控制心皮的数目,并和人类致癌基因c-H-rasc-H-rasp21p21具有相似的结构序列。具有相似的结构序列。??,果实的大小变化,可能是由于表等位基因表明,果实的大小变化,可能是由于表达规则的改变,而不是在序列和编码蛋白结构的改变。达规则的改变,而不是在序列和编码蛋白结构的改变。%且在驯化中一%且在驯化中一个关键过渡期起重要作用的个关键过渡期起重要作用的QTLQTL经定位证明:经定位证明:––所有野生所有野生LycopersiconLycopersicon番茄种迄今为止在这个位点上有小果等位基番茄种迄今为止在这个位点上有小果等位基因因––栽培品种在该位点有大果等位基因栽培品种在该位点有大果等位基因––L. L. pennelliipennellii的等位基因小果对大果只是部分显性的等位基因小果对大果只是部分显性通过图位接近(染色体步移)方法,的通过图位接近(染色体步移)方法,的DNADNA我们已经克隆和测序了一段长度为我们已经克隆和测序了一段长度为19-kb19-kb序列含有此序列含有此位点,并确定该基因影响位点,并确定该基因影响QTLQTL效应。效应。 遗遗传传验验证证构建酵母人工染色体(YAC) YAC构建一个cDNA文库小果型的L. pennellii LA716 隆进行鉴定分离出四个特异的克隆(cDNA27,cDNA38,cDNA44和cDNA70)(NILs)回交得到3472个F2分离群体构建高精度图谱,得到4个克隆随后用4个cDNA构建L. pennellii全基因组DNA黏粒文库四个阳性,不重叠的黏粒(cos50,cos62,cos69和cos84)。黏粒文库:黏粒(cosmid)也称柯斯质粒,是人工构建的由λ噬菌体的COS序列、质粒的复制子序列及抗生素抗性基因序列组合而成的一类特殊的质粒载体。COS序列是DNA包装进噬菌体颗粒所必须的。复制子通常是使用ColEl或pMBl的复制起始位点。黏粒具有λ噬菌体的某些性质,在克隆了大小合适的外源DNA片段并且在体外被包装成噬菌体颗粒后,能高效转导对入噬菌体敏感的大肠杆菌宿主细胞。在宿主细胞内按λ噬菌体方式环化,但不能通过溶菌周期,无法形成子代噬菌体颗粒(因分子中不具入噬菌体全部必要基因)。它也具有质粒载体的主要性质,在宿主细胞内可以像其他质粒一样复制,并与松弛型质粒相同,适量的氯霉素可促进扩增。因具抗生素基因,可以通过抗生素抗性筛选重组子。黏粒载体在构建时也加上了设在插入失活基因内的多克隆位点。黏粒载体的分子较小(—24kb),但克隆容量很高,对外源DNA长度的要求是30~45 kb,上限几乎是入噬菌体载体容量(23 kb)的2倍,所以黏粒载体在核基因组文库构建上具有相当的优势,可克隆包括3,和5’调控区在内的完整的植物基因。目标基因Mogeor(保鲜-市场型)TA496(加工型)转化株(R0)转化株(R0)