Q&A-支原体污染现象检测及处理方法.pdf.pdf

For research use only MycoplasmaOUT? Q&A 1 , Q: 支原体污染对细胞有什么危害? A: 支原体污染后,不会使细胞死亡可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,细胞无明显变化,外观上给人以正常感觉,实则细胞收到多方面潜在影响,如引起细胞变形, 影响 DNA 合成,抑制细胞生长等,以致影响实验数据的可信度。 2, Q: 支原体污染有什么特征? A: 细胞状态变差,生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点,但培养基一般不发生浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细胞漂浮,完全死亡。具体特征请见附件 2 。 3 , Q: 细胞培养时,显微镜下的小黑点是什么? A : 支原体污染后, 细胞凋亡坏死,释放出大量碎片,看起来就像小黑虫子。 4 , Q: 细胞通过何种途径感染支原体? A: 支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(某些支原体在人体是正常菌群如口腔中的支原体)、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染等等,由于支原体大小为 ~ um ,无细胞壁,可透过一般过滤膜( - um ),血清中也可能含有支原体。 5 , Q: 支原体污染如何检测? A: 利用支原体具特殊专一性之 primers ,经由 PCR 反应来复制支原体 DNA 。所用 primers 来自支原体的 conserved 16S -23S rRNA 序列,由于此段序列依支原体种类不同而不同, 因此可依所复制之 DNA 大小及其 restriction fragm ent 大小差异来作侦测与鉴定支原体(具体方法见附件)。 6 , Q: 如何清除支原体? A: 由于市场同类产品都为抗生素类,对细胞本身也会产生一定影响,而且有反复发作的风险,吉锐生物推出的 MycoplasmaOUT?,活性成分为抗菌肽,经多方测试表明对大部分细胞无毒害作用,因其独特的作用原理,支原体不会对其产生耐药性,并且其作用时间短,在三天内就可杀灭支原体,并自动降解成氨基酸,不会对细胞造成二次污染。 For research use only 7 , Q: 为什么在培养细胞前要加入 MycoplasmaOUT? Prevention ? A:由于支原体污染后能够进入细胞,而 MycoplasmaOUT?不能够进入细胞内也就不能杀灭已经进入细胞的支原体,而这部分细胞死亡时会释放其内部的支原体,需要 MycoplasmaOUT ?Prevention 来杀灭新释放出的支原体,以防止新生细胞受到污染。附件 1 : 支原体检测操作步骤: 1. 细胞铺 24 孔板, 5x10 4 个/ 孔; 2 . 每隔 1d 取细胞培养液留样,连取 3d ; 3 .细胞培养液 95℃水浴加热 5min ,12000rpm 离心 1min ,取上清做下一步的巢式 PCR 检测; 4 . 巢式 PCR 第一轮体系和程序: 体系:模板: 4步骤所得细胞培养液 2ul Primer -F(10 uM): 1ul Primer -R(10 uM): 1ul dNTP Mixture