大花蕙兰组织培养和快速繁殖方法.doc

大花蕙兰组织培养和快速繁殖方法.doc大花蕙兰组织培养和快速繁殖方法大花蕙兰采用传统的分株繁殖,繁殖速度慢、周期长,尤其对国外新引进的优良品种,难以迅速占领市场、满足需求。大花蕙兰类组培快繁国内公开报道的仅限于虎头兰和'水晶多芭'等个别品种,因其各种、品种间培养有很大差异,对于新品种'西维亚'、'玛利莲梦露’、'蒙米拉丝'、'女皇’的培养国内尚无报道,对大花蕙兰的系统研究也远远跟不上市场的发展速度,我们于1998年以新引进的优良大花蕙兰品种为材料,利用组织培养和快速繁殖技术,开展了大规模工厂化育苗的系统研究,提高了诱导成苗率和繁殖速度,大大降低了成本,使本项技术在市场中更具竞争能力和推广价值,并繁育出大量种苗,批量供应市场,为大花蕙兰工厂化育苗提供了科学依据与参考。把母株放在温室内盆栽培养,于2月底〜4月初陆续从母株上取8cm左右的新芽,从基部切离,用自来水冲洗,再用洗洁净溶液浸泡5min,自来水冲洗lOmin,剥去最外几层叶片,并剪去芽的上半段。然后在超净工作台上采用3步灭菌处理法处理:先在70%的酒精中处理6s,立即投入10%次氯酸钠溶液中lOmin,稍加摇动,取出后用无g[水冲洗,剥去外层2〜3片叶;再放入5%的次氯酸钠溶液5min,取出后无菌水冲洗,剥至最后一枚叶片;再放入1%的次氯酸钠溶液Imin,取出后无菌水冲洗数次。以上次氯酸钠溶液中均加入Tween-60以利杀菌剂更有效地发挥作用。在无菌条件下剥出约5min长的茎尖,以生长点为中心,用解剖刀把茎尖切成4个小方块,分别接入已准备好的培养基上。-,蔗糖2%,%〜%,温度22〜25°C,光照强度2000Lx,每日光照12h。外植体接在附加一定激素配比的培养基上,20d左右外植体周围出现许多白色颗粒状愈伤组织,继续培养逐渐转为绿色,25d可形成大量原球茎,以后每隔20d进行一次继代培养,若继代不及时易形成不定芽,需在继代时切去,影响原球茎增殖,造成浪费。继代前观察统计试验结果。大花蕙兰对KT的敏感程度高于对6BA的敏感程度,相同浓度的NAA下,KT用量稍微增减即会产生明显差异,低浓度的KT对原球茎增殖有明显促进作用,。,。随机分切法虽操作快捷,但有大量切割过于碎小的培养块死亡;纵切法操作需细致、费时,但原球茎增殖数多,大小一致;碾压和井字型切割(底部不分开)原球茎增殖时间可缩短、可加快继代,但单个继代原球茎增殖倍数减少。通过前期初步筛选后,,,把原球茎切块分别接种MS,12MS,VW,KC为基本培养基的培养基上,测试不同培养基种类对原球茎增殖的影响。结果表明:MS,1/2MS,VW,KC均可应用于原球茎增殖,但以KC效果最佳。MS,1/2MS,VW也能分化和增殖原球茎,但增殖缓慢、色淡。附加香蕉泥对原球茎增殖有明显促进作用,,且生长健壮,色泽深绿。用固体培养基培养最差,增殖速度慢,且易导致原球茎块死亡,继代不及时易分化出芽,但适合芽和根的分化培养;液体培养增殖较快,但生长不够健壮,色黄绿,质地较疏松;半固体培养基(减少琼脂用量)最佳,原球茎增殖量大,色深绿,健壮。每隔4〜5d对半固体培养基的培养瓶震荡,摇动一次,生长增殖效果更好。