HCV—肝细胞肝癌的精氨酸酶通路的研究.pdf

上海交通大学
博士学位论文
HCV—肝细胞肝癌的精氨酸酶通路研究
姓名:曹文俊
申请学位级别:博士
专业:临床检验诊断学
指导教师:樊绮诗
20080501
桓蜗赴伟┑木ò彼崦竿费芯摘要本论文主要研究丙型病毒性肝炎病毒琀腥后,宿主肝细胞内精氨酸酶珹谋泶锸欠穹⑸⒉舛ㄏ赴で榭觥Q芯发现,橹伟┫赴虷瓾细胞中和的表达均被明显上调,粜韵赴隙哉障赴哂邢灾纳び攀啤第二部分首先采用特异的椒ㄒ种艸瓾细胞的的表达笛樽,同时以不针对任何已知基因的魇笛槎照哉兆,观察细胞生长的变化。结果显示,干扰后实验组肝细胞的表达被明显抑制,而对照组表达未受明显影响。相应地,实验组细胞生长速率明显减缓,部分肝细胞死亡,提示表达被上调是俳伟┫赴さ闹匾T颉N颐嵌愿扇臕一氧化氮合酶..,并以流式细胞术分析细胞周期,结果显示,抑制表达后被上调且浓度升高,细胞周期发生变化,提示凡斡上海交通大学医学院博宦畚,
俳蜗赴さ幕啤第三部分我们以瓾细胞注射裸鼠皮下组织后,观察对裸鼠体内肿瘤形成和小鼠生存的影响,并对实验肿瘤进行病理学分析,以实时技术检笾琢鲎橹⒏巫橹头巫橹惺欠翊嬖诓毒核酸,并采用免疫组化技术对肿瘤中和的细胞定位和表达进行分析。结果显示,与对照细胞相比,瓾细胞注射裸鼠后形成肿瘤的小鼠比例高、肿瘤体积大、荷瘤小鼠生存期短。注射了瓾细胞所形成的皮下肿瘤组织表现出与嗨频牟±学改变。另外,小鼠肝脏中肝细胞发生类似急性肝炎的变化。肝脏和肿瘤组织中检测到本研究初步建立了腥炯癏的小鼠模型。研究显示,房赡懿斡肓薍感染导致的原发性肝细胞肝癌的发病机制。关键词:肝炎病毒,丙型,肝细胞肝癌,精氨酸酶,一氧化氮合酶,一氧化氮上淘交通大学医学院博士学位论文
精氨酸是人体所需的半必需氨基酸,机体在一般代谢状态下精氨酸的需要量可由体内合成并供应,而在生长迅速的组织和细胞中必须由外源营养途径提供。在绝大多数肿瘤细胞的生长中,精氨酸是一种必需氨基酸。肝癌细胞的快速生长同样依赖外源精氨酸的存在。向体外培养的肿瘤细胞中加入合成精氨酸的底物或其他氨基酸和营养物质均不能纠正去精氨酸对肿瘤细胞造成的生长抑制状态,说明精氨酸的作用具有不可替代性,精氨酸对肿瘤细胞生长的作用不是单纯作为合成代谢的原料或作为能量物质,可能具有更重要的意义。由于精氨酸是精氨酸一精氨酸酶一一氧化氮合酶一一氧化氮通路韵录虺艫通路闹匾W槌刹糠郑透窝撞《琀赡芡ü苯踊蚣浣拥赜跋旄猛返鹘诟蜗赴闹屑浯谢,使肝细胞的中间代谢出现严重障碍,引起肝细胞的代谢紊乱和生长失控,导致同的催化作用,但在染色体定位及表达部位等方面有所不同。主要在肝细胞表达,正常时表达处于稳定的基础水平,在肾脏和红细胞表达为主。博士等以基因芯片研究腥靖伟┫赴谋泶锲妆浠⑾侄諥在性肝细胞内表达均被上调,且很多重要代谢酶也发生改变,表明脑炝烁蜗赴的代谢基因表达谱,这些变化涉及所有三大类营养物质的代谢酶。粜愿蜗赴的代谢发生显著变化并表现出的代谢异常可能与此密切相关。ü蛩匮反化底物ò彼嵘赡蛩兀翘迥诎被岽徊锱懦鎏逋獾姆绞剑逋ü醚环保持氮平衡。由于肿瘤细胞的代谢加速,更多的代谢废物需要排出肿瘤细胞以使其维持高速生长,谋泶锷系髡每陕阏庖恍枨蟆4送猓珹参与多胺代谢,是其合成步骤中一个重要的代谢酶。多胺主要包括腐胺、精胺和精脒等,是细胞生长必需的促进因子,多胺合成增加使肿瘤细胞拥有充足的代谢原料,促进瘤细胞的生长,反之,瘤细胞因代谢物缺乏则生长被抑制。从这一角度看,泶镌黾涌中文详细摘要细胞病变。研究发现,体内存在两种类型的精氨酸酶珹虯,具有相上海交通大学医学院博宦畚
能具有促进细胞生长的作用,若干扰淖B己捅泶锘蛞种破湔9δ艿姆⒒釉可能影响肝细胞的代谢并进一步减缓其生长。另一方面,胍谎趸:厦,共用底物ò酸,呋孜锷删哂卸嘀稚锘钚缘囊谎趸琋,当环境中精氨酸的浓度绝对或相对较低时,二者将竞争底物精氨酸。此时,表达上调的催化底物生成尿素或合成多胺的反应具有优势,使肿瘤细胞得以保持快速生长的同时避免发生代谢不平衡。此外,拇罅烤ò彼崾筃的底物浓度相对不足,减少了合成,避免因过量影响细胞周期的控制点。以上因素的综合作用促有鉴于此,本研究的目的是通过分析粜愿伟┫赴贏虯谋达,观察欠窨梢餉通路的重要成员母谋洹4送猓ü蚋扇技术抑制粜愿蜗赴腁泶铮鄄於韵赴さ挠跋觳⑼狈治鯝通路的变化,研究系鰽对细胞生长的作用及可能机制。本研究的基因表达分析针对伟┳橹虷阳性肝细胞。性组织采用经病理学确诊的质醣瓯荆琀阳性细胞采用由士等经蜃樽H靖蜗赴⒌。由于系魉拗鞲蜗赴蠥并促进细胞生长加速,以椒ㄓ行б种艫诟蜗赴械淖B己捅泶锟裳芯